スフィンゴ脂質の合成・分解両経路に関わるＴＥＲの機能解析

TER 参与鞘脂合成和降解途径的功能分析

• 批准号: 15J02525
• 负责人: 安部 健介
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J02525/
• 关键词: 脂質生化学; スフィンゴ脂質; 極長鎖脂肪酸; スフィンゴシン1-リン酸

TERによる極長鎖脂肪酸合成経路制御機構の解析のため，出芽酵母を用いた系を構築した。これまでにTERの極長鎖脂肪酸合成酵素との結合に必要なアミノ酸残基は不明であったため，アミノ酸配列が既知のTERホモログで保存されたアミノ酸残基に着目し，その残基をアラニンに置換した変異体を作製した。また，シロイヌナズナTERホモログではTERの141番目のアルギニン（R141）に相当する残基のアラニンに置換体は出芽酵母TERホモログTSC13遺伝子欠損を相補しないことが知られている。そのため，TERのR141に対してアラニン置換体と嵩高いチロシンに置換した変異体（R141Y）を作製した。作製したTER変異体を野生型HACDと共にTSC13遺伝子欠損株に形質転換した。解析の結果，R141Y変異体はHACDの安定性を著しく低下させることを見出し，TERのHACDとの相互作用に必要なアミノ酸残基が明らかとなった。本結果からTERによる極長鎖脂肪酸合成制御機構が新たに明らかとなった。前年度はTERLに飽和脂肪酸伸長活性がないことを示したので，本年度は不飽和脂肪酸伸長活性測定系を構築した。酵母伸長サイクルは不飽和脂肪酸を伸長しないため，前年度に作製したTERL導入TSC13欠損株に不飽和脂肪酸縮合活性を持つヒトELOVLを導入した。測定系の構築は完了したが，辞退となったため，詳細な解析に至らなかった。また，生体におけるTERLの役割を明らかにするため，CRISPR/Cas9システムを用いたTerl遺伝子ノックアウトマウス作成を行った。作製したキメラマウスと野生型マウスとの交配によってTerlヘテロノックアウトマウスを作製した。作製したヘテロマウスは野生型対立遺伝子によって野生型と同様の表現型を示した。TERLホモノックアウトマウスの作製，解析によって生体での役割が明らかになることが期待される。

为了分析TER的极端链脂肪酸合成路线控制机制，构建了使用发芽酵母的系统。到目前为止，将TER的极端链脂肪酸合成酶键合所需的氨基酸残基尚不清楚，因此氨基酸序列集中在已知的TER同源物中存储的氨基酸残基，并将残基制成alanin。生产。此外，已知Sirinazuna ter homo rog是，TER的141st Arginine（R141）的alginine（R141）中的取代基并不补充Bud酵母TSC13基因缺乏症。因此，将变体（R141Y）替换为TER的R141，被Alanin取代基和欺凌酪氨酸所取代。将产生的TER突变体与野生HACD一起转化为TSC13基因缺乏菌株。分析的结果，R141Y突变体发现HaCD的稳定性显着降低，揭示了TER HaCD所需的氨基酸残基。从此结果，新揭示了TER的极端链脂肪酸合成控制机制。在上一个财政年度，TERL表明没有饱和脂肪酸的延伸活性，因此今年我们建立了一个不饱和的脂肪酸延伸活性测量系统。由于酵母延长周期没有扩展不饱和脂肪酸，因此TERL简介TSC13缺乏菌株是在上一个财政年度产生的，它引入了带有不饱和脂肪酸的人Elovl。测量系统的构建完成了，但已被拒绝，因此我们没有进行详细的分析。此外，为了阐明Terl在活体中的作用，我们使用CRISPR/CAS9系统创建了TERL基因敲除小鼠。通过越过产生的嵌合老鼠和野生小鼠，产生了Terl杂音小鼠。产生的杂音小鼠显示出与野生型对抗基因相同的表达类型。预计Terl Homonock Out小鼠的生产和分析将揭示生物的作用。

项目成果

Biochemical analysis of the mutation for non-syndromic mental retardation in the trans-2-enoyl-CoA reductase TER gene involved in fatty acid elongation

参与脂肪酸延伸的反式2-烯酰辅酶A还原酶TER基因突变的生化分析

• 发表时间: 2015
• 作者: Abe K;Wakashima T;Ohno Y;Kihara A
• 通讯作者: Kihara A