ハイスループットRNAi法によるイネいもち病菌のゲノム機能解析

利用高通量RNAi方法对稻瘟病菌进行基因组功能分析

• 批准号: 08F08426
• 负责人: 中屋敷 均
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08426/
• 关键词: RNAサイレンシング; RNAi; イネいもち病菌; ポストゲノム; 病原性遺伝子

当研究室で構築されたハイスループットRNAiベクターpSilent-Duall (pSD1)を用いて、植物細胞壁分解酵素を対象としてサイレンシングによる機能解析を試みた。本研究では,40～50bpの配列を対象遺伝子から抽出し、それをつなげた合成遺伝子をサイレンシングトリガーとするBuilding Blocks法を用いた。対象とした遺伝子群は、細胞壁加水分解酵素であるxylanaseおよびcellobiohydrolase遺伝子ファミリーである。コムギいもち病菌のxylanaseサイレンシング株では病原性が低下していたが、細胞観察の結果、野生株に比べ貫穿糸形成が有意に抑制され、HR誘導の割合が増加していることが明らかとなった。また、垂直侵入後の水平的な感染拡大の速度も低下しており、xylanase遺伝子群が本菌の角皮侵入および病斑拡大の両方に機能していることが示唆された。一方、cellobiohydrolaseサイレンシング株においても病原性の低下がやや見られたが、貫穿糸形成率の低下より、パピラ形成誘導の割合が増加しており、これらの酵素群が本菌の異なった感染場面で機能している可能性が示唆された。

利用本实验室构建的高通量RNAi载体pSilent-Dual (pSD1)，我们尝试通过沉默植物细胞壁降解酶来分析其功能。在这项研究中，我们使用了 Building Blocks 方法，从目标基因中提取 40 至 50 bp 的序列，并将它们连接到合成基因作为沉默触发器。目标基因组是细胞壁水解酶木聚糖酶和纤维二糖水解酶基因家族。尽管木聚糖酶沉默的小麦瘟疫菌菌株的毒力降低，但细胞观察表明，与野生型菌株相比，穿孔菌的形成受到显着抑制，并且HR诱导率增加。此外，垂直入侵后感染的水平传播率也降低，表明木聚糖酶基因组在该真菌的角质层入侵和病灶扩展中发挥作用。另一方面，虽然在纤维二糖水解酶沉默菌株中观察到致病性略有下降，但乳头状形成诱导率增加而不是穿支形成率下降，表明这些酶组可能用于不同感染场景有人认为这种细菌可能正在发挥作用。

项目成果

Dual promoter vectors for high-throughput gene function analysis by RNA silencing

通过 RNA 沉默进行高通量基因功能分析的双启动子载体

• 发表时间: 2009
• 作者: Nguyen; et al.
• 通讯作者: et al.