マウスの咀嚼筋の生後発達におけるエピジェネティクス調節機序の解明

阐明小鼠咀嚼肌出生后发育的表观遗传调控机制

基本信息

批准号：
25463201
负责人：
山根明
金额：
$ 3万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25463201/
关键词：
舌筋 microRNA エピジェネティクス咀嚼リアルタイムPCR in situ hybridization

项目摘要

本研究の最終的な目的は，咀嚼筋の生後発達過程における microRNA を介したエピジェネティックな調節機構を明らかにすることであり，咬筋，側頭筋，顎二腹筋等の咀嚼筋の生後発達過程を解明することは，小児への適切な歯科治療を行うための重要な基礎知識となる．まず 1, 4, 8, 12週齢のマウスをエーテル麻酔により安楽死させ，咀嚼筋（咬筋，側頭筋，顎二腹筋）および比較対象のための腓腹筋，前頸骨筋，ヒラメ筋，横隔膜をそれぞれ摘出し，まずReal-Time PCR 法用に total RNA を抽出し，また in situ hybridization 実験用には，4％パラホルムアルデヒド溶液にて固定，保存した．Real-Time PCR 法によりそれぞれの筋における miRNA-1, 206, 133, 24, 29, 181 の発現量を調べたところ，1，4週齢の舌筋では miR-1 が非常に多量に発現し，またmiR-1 と同じターゲットを有するファミリーである miR-206 は4週齢の咬筋に特異的に発現していることが明らかになった．現在24週齢においても同様の解析を進めている．またこれらの microRNA についてより詳細な解析をするため，さらにこれら以外の microRNA の発現変化を調べるために miRNA アレイ解析を予定し，このための試料の調整を行っている．

本研究的最终目的是阐明microRNA在咀嚼肌出生后发育过程中介导的表观遗传调控机制，为阐明咬肌、颞肌、二腹肌等咀嚼肌的出生后发育过程提供了解。为儿童提供适当牙科治疗的重要基础知识。首先，用乙醚麻醉对 1、4、8 和 12 周龄的小鼠实施安乐死，并处死咀嚼肌（咬肌、颞肌和二腹肌），以及作为比较的腓肠肌、胫骨前肌、比目鱼肌、取出隔膜，首先提取总RNA进行Real-Time PCR方法，然后进行原位杂交。为了进行实验，将其固定并保存在4%多聚甲醛溶液中。当我们使用实时 PCR 研究每块肌肉中 miRNA-1、206、133、24、29 和 181 的表达水平时，我们发现 miR-1 在 1 周和 4 周的舌肌中表达极其丰富。此外，与miR-1具有相同靶标的家族成员miR-206被发现在4周龄大鼠的咬肌中特异性表达。目前正在对 24 周龄的大鼠进行类似的分析。此外，为了对这些microRNA进行更详细的分析，并检查其他microRNA的表达变化，我们计划进行miRNA阵列分析，并正在为此目的准备样品。