マウス舌筋肉発生分化における成長因子と筋肉特異的転写因子の役割

生长因子和肌肉特异性转录因子在小鼠舌肌发育和分化中的作用

基本信息

批准号：
08672146
负责人：
山根明
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:トランスフォーミング成長因子α、インシュリン様成長因子IIと筋肉特異的転写因子によるマウス舌骨格筋発生分化調節機構を明らかにする目的で以下の実験を行った。材料及び方法:1 受精11日後のICRマウス胎児より舌を含む下顎を摘出し、無血清、化学合成培養液を用いて8日間培養した。10,20,40ng/mlの濃度になるようトランスフォーミング成長因子α、または50,100,200ng/mlの濃度になるようインシュリン様成長因子IIを培養液中に添加した。2 培養終了後、下顎よりRNAを精製し、逆転写を行った後、competitive PCR法を用いて、デスミンと骨格筋特異的転写因子(MyoD,Myf5,myogenin,MRF4)の発現を測定した。デスミンは筋肉分化の指標として用いた。結果および考察:1 トランスフォーミング成長因子αは約110%のデスミンmRNAの増加、約750%のMyoD mRNAの増加、約150%のmyogenin mRNAの増加を引き起こした。一方、トランスフォーミング成長因子αによる約50%のMyf5の減少が観察された。MRF4は検出されなかった。以上のデータによりトランスフォーミング成長因子αはMyoDとmyogeninの転写を制御することによりデスミンの転写および筋肉発生を促進している可能性が示唆された。2 インシュリン様成長因子IIはデスミンmRNAレベルに統計的に有意な変化は引き起こさなかった。培養筋芽細胞系においてはインシュリン様成長因子IIは筋肉の発生分化を促進するという報告が多くあり、今回の実験の結果はそれらの報告とは異なっている。この原因については、発生中のマウス舌筋肉中にはインシュリン様成長因子の作用を阻害するインシュリン様成長因子結合蛋白質が多く存在しているためと考えられる。

目的：通过以下实验阐明转化生长因子α、胰岛素样生长因子II和肌肉特异性转录因子对小鼠舌骨骼肌发育和分化的调控机制。材料和方法： 1 受精后 11 天，从 ICR 小鼠胎儿中取出包括舌头在内的下颌，并在无血清化学合成培养基中培养 8 天。将转化生长因子 α 以 10、20 和 40 ng/ml 的浓度添加到培养基中，或将胰岛素样生长因子 II 添加到 50、100 和 200 ng/ml 的浓度。 2.培养后，从下颌骨中纯化RNA，进行反转录，并使用竞争性PCR测量结蛋白和骨骼肌特异性转录因子（MyoD、Myf5、肌细胞生成素、MRF4）的表达。结蛋白被用作肌肉分化的指标。结果与讨论： 1 转化生长因子α导致结蛋白mRNA增加约110%，MyoD mRNA增加约750%，肌细胞生成素mRNA增加约150%。另一方面，由于转化生长因子 α，观察到 Myf5 减少了约 50%。未检测到 MRF4。这些数据表明，转化生长因子 α 可能通过控制 MyoD 和肌细胞生成素的转录来促进结蛋白转录和肌肉发育。 2 胰岛素样生长因子 II 不会引起结蛋白 mRNA 水平的统计显着变化。有许多报道称胰岛素样生长因子II促进培养的成肌细胞系统中的肌肉发育和分化，而本实验的结果与这些报道不同。其原因被认为是在发育中的小鼠舌肌中存在许多胰岛素样生长因子结合蛋白，它们抑制胰岛素样生长因子的作用。