疎水性タグを用いたヒトインスリンの液相完全化学合成

使用疏水标签完成人胰岛素的液相化学合成

• 批准号: 14J06938
• 负责人: 藤田 裕子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06938/
• 关键词: ペプチド; 次世代シークエンサー; トランスクリプトーム解析; 細胞数計測; 細胞形態解析; Mahafacyclin B; ＣＨＯ細胞; 全遺伝子発現変動解析; 発現変動遺伝子; 細胞毒性; 疎水性タグ; ペプチド環化; コンフォメーション変化; アルカリ金属塩

今年度は前年度、ペプチドを溶解させた培地で培養した培養哺乳類細胞CHO-K1と、ペプチドを含まない培地で培養した同細胞のトランスクリプトームを比較することで、ペプチドによって誘導される細胞応答を明らかにすることを目的として行った次世代シークエンサーを用いたトランスクリプト―ム解析により展望可能性が認められた研究結果を更に深めるため、化学合成ペプチドの細胞への生理学的影響を多面的かつ精度よく評価するための手法を確立することにした。前年度の研究の課題として、設定した薬剤添加濃度が適したトランスクリプトーム応答をもたらしているかを調べる必要があった。そこで今年度は、前年度のシャノンの情報エントロピーという指標に加えて、コルモゴロフ複雑性を用いて細胞のトランスクリプトーム不均一度を評価した。また、対象の生理学的影響は、細胞増殖や細胞形態変化といった直接観察可能な要素も併せて評価するのが好ましい。そこでモデルペプチドの細胞増殖・生存に関して、トリパンブルーで死細胞を染色した細胞集団の自動細胞計測装置を用いた細胞数の直接計測によって評価した。また同装置で取得できる細胞写真の画像解析から細胞形態の評価を行った。その結果、細胞のトランスクリプトーム不均一度の評価を通して設定した実験の妥当性を確認することで、発現変動遺伝子解析結果に対する信頼性を高めることができた。また、ペプチドの細胞に与える細胞増殖、細胞死や細胞形態といった複数の影響を一つの実験系から得られる情報を用いて評価することができた。

在本财年，我们通过比较在含有肽的培养基中培养的培养哺乳动物细胞CHO-K1和在不含肽的培养基中培养的相同细胞的转录组来研究肽诱导的细胞反应，以进一步深化研究成果，通过使用下一代测序仪进行转录组分析发现其具有广阔的前景，我们进行了一项多方面的研究来研究化学合成肽对细胞的生理影响，我们决定建立一种准确评估的方法。作为去年的一个研究课题，有必要检验设定的药物添加浓度是否能带来适当的转录组反应。因此，今年，除了上年的香农信息熵指数外，我们还使用柯尔莫哥洛夫复杂度来评估细胞转录组异质性程度。此外，最好结合直接可观察的因素（例如细胞增殖和细胞形态变化）来评估靶标的生理效应。因此，通过使用自动细胞计数装置对台盼蓝染色的细胞群直接计数细胞数来评价模型肽的细胞增殖和存活。还通过对用相同装置获得的细胞照片的图像分析来评估细胞形态。因此，通过评估细胞转录组异质性来确认设定实验的有效性，我们能够提高基因表达变异分析结果的可靠性。此外，我们能够利用从单个实验系统获得的信息来评估肽对细胞的多种影响，例如细胞增殖、细胞死亡和细胞形态。

项目成果

Hydrophobic benzyl amines as supports for liquid-phase C-terminal amidated peptide synthesis: application to the preparation of ABT-510

疏水性苄胺作为液相C端酰胺化肽合成的载体：在ABT-510制备中的应用

• DOI: 10.1002/psc.2791
• 发表时间: 2015
• 期刊: J. Peptide Science
• 作者: Emiko Matsumoto;Yuko Fujita;Yohei Okada;Esko I. Kauppinen;Hidehiro Kamiya;Kazuhiro Chiba
• 通讯作者: Kazuhiro Chiba