新規結核菌受容体ＭＣＬが誘導するＭｉｎｃｌｅとは異なる獲得免疫活性化機構の解明

阐明新型结核杆菌受体MCL诱导的与Mincle不同的获得性免疫激活机制

基本信息

批准号：
14J03573
负责人：
森大輝
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J03573/
关键词：
自然免疫学 C型レクチン自然免疫 C型レクチン受容体

项目摘要

自然免疫応答はC型レクチン受容体などの認識受容体によって惹起される。多くのC型レクチン受容体はマクロファージなどのミエロイド系細胞に発現し、外来病原菌由来分子を認識する。一方、異常自己の認識に寄与することも報告されているが、内因性リガンドの同定は遅れている。C型レクチン受容体Dectin-2は病原体由来α-マンナンを認識するが、内在性リガンドに関する報告はない。そこで、リガンドの認識をGFPの発現でモニターできるレポーター細胞を作製し、様々な細胞と共培養したところ、骨髄由来樹状細胞共存下で強くGFP発現が誘導されることを見出した。このレポーター活性は、高濃度のマンノースの添加及びDectin-2のマンノース結合配列への変異の導入によって消失した。次に、Dectin-2と結合する分子を同定するため、ヒト免疫グロブリンのFc領域とDectin-2の細胞外領域を融合させたキメラタンパク質を作製し結合する分子を精製した。すると、70 kDa付近にDectin-2に特異的に結合する分子の存在が示唆され、質量分析法によってこの分子がβ-glucuronidaseであることが判明した。HEK293T細胞に強制発現させたβ-glucuronidaseでも、Dectin-2と結合することを証明し、この結合はβ-glucuronidaseに存在するN型糖鎖修飾配列に変異を導入すると顕著に低下した。また、マクロファージ細胞株でβ-glucuronidaseを強制発現させることで、Dectin-2レポーター細胞の活性が増大した。以上の結果より、Dectin-2は内在性リガンドの一つとしてβ-glucuronidaseを認識することが明らかとなり、C型レクチン受容体が内在性タンパク質の糖鎖の状態をモニターし、異常な自己細胞の感知に寄与している可能性が強く示唆された。

先天免疫反应是由识别受体（例如C型凝集素受体）触发的。许多C型凝集素受体在髓样细胞（例如巨噬细胞）中表达，并识别源自异物病原体的分子。另一方面，据报道，它有助于识别异常自我，但内源配体的鉴定已延迟。 C型凝集素受体Dectin-2识别病原体衍生的α-Mannans，但没有内源性配体的报道。因此，制备了可以通过GFP表达来监测配体识别的报告细胞并与各种细胞共培养，并发现在存在骨髓衍生的树突状细胞的情况下，GFP表达强烈诱导。通过添加高浓度的甘露糖和将突变引入Dectin-2的甘露糖结合序列，从而消除了这种报告基因活性。接下来，为了鉴定与Dectin-2结合的分子，通过融合人类免疫球蛋白的FC区域和Dectin-2的细胞外区域产生嵌合蛋白，并纯化了结合分子。这表明存在特异性结合70 kDa的Dectin-2的分子的存在，质谱显示该分子是β-葡萄糖醛酸苷酶。事实证明，在HEK293T细胞中迫切表达的β-葡萄糖醛酸苷酶也与Dectin-2结合，并且当将突变引入N型糖基化修饰序列中时，这种结合显着降低。另外，巨噬细胞系中β-葡萄糖醛酸苷酶的强迫表达增加了Dectin-2报告基细胞的活性。以上结果表明，Dectin-2识别β-葡萄糖醛酸苷酶是内源配体之一，并强烈建议C型凝集素受体监测内源性蛋白的聚糖状态，这有助于检测异常自体细胞。