Ｔ細胞分化可塑性の分子メカニズムの解明と免疫疾患治療への応用

T细胞分化可塑性分子机制阐明及其在免疫疾病治疗中的应用

基本信息

批准号：
12J40125
负责人：
井上直子
金额：
$ 2.53万
依托单位：
The University of Tokyo (2014)Keio University (2012-2013)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ナイーブT細胞から誘導性抑制性T細胞(iTreg)を作製し免疫疾患治療や臓器移植の拒絶反応の軽減に適用できる事が多くのモデル系で示されている。しかし多くの自己免疫疾患では抗原が同定されていない。抗原特異的なエフェクターT細胞をTregに転換することが最も効果的な治療法になりうると考えられる。そこで高度に分化させたTh1やTh17からFoxp3陽性Tregを作製することを試みた。しかし一旦分化したTh1やTh17細胞は通常のTGFβ存在下の培養条件下ではFoxp3を発現誘導することはできなかった。そこでメモリー化を促進するためにTh1細胞を胸腺ストローマ細胞株Tst4フィーダー細胞上で培養したところ5%ほどの細胞がFoxp3陽性となった。さらにヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤(BIXO1294)、DNAメチルトランスフェラーゼ阻害剤(5AzaC)、ヒストン脱アセチラーゼ阻害剤などのエピジェネティック阻害剤の添加によってさらにFoxp3陽性細胞が増加する条件を見いだした。これらの細胞をFoxp3でソーティングし遺伝子プロファイリングを行ったところ、CD25やCTLA4の発現などTregとして機能分子を発現していることがわかった。今後このようなreprogramed Tregが個体でも機能するのか検討する。さらに様々な薬剤の組み合わせを行ってTh17から最も効率よくiTregを誘導する条件を検討した。最も効率よく誘導する組み合わせとして5aza-dC、ATRA、Rapamycin、8-Br-cAMP、TWSll9という5つの薬剤を組み合わせることによって相乗的にTh17からFoxp3陽性Tregを誘導する効果が見られた。

许多模型系统表明，诱导性抑制性T细胞（iTreg）可以从幼稚T细胞中产生，并应用于治疗免疫疾病和减少器官移植中的排斥反应。然而，在许多自身免疫性疾病中，抗原尚未被鉴定。将抗原特异性效应 T 细胞转化为 Tregs 可能是最有效的治疗方法。因此，我们尝试从高度分化的 Th1 和 Th17 中产生 Foxp3 阳性 Tregs。然而，一旦分化的Th1和Th17细胞在存在TGFβ的正常培养条件下就不能被诱导表达Foxp3。因此，当Th1细胞在胸腺基质细胞系Tst4饲养细胞上培养以促进记忆形成时，大约5%的细胞变成Foxp3阳性。此外，我们发现通过添加表观遗传抑制剂，例如组蛋白甲基转移酶抑制剂（BIXO1294）、DNA甲基转移酶抑制剂（5AzaC）和组蛋白脱乙酰酶抑制剂，可以进一步增加Foxp3阳性细胞的数量。当我们使用 Foxp3 对这些细胞进行分类并进行基因分析时，我们发现它们表达功能性分子作为 Tregs，例如 CD25 和 CTLA4 的表达。未来，我们将研究这种重新编程的 Tregs 是否也在个体中发挥作用。此外，我们还研究了通过组合各种药物最有效地从 Th17 诱导 iTreg 的条件。 5aza-dC、ATRA、雷帕霉素、8-Br-cAMP 和 TWS119 这五种药物的最有效组合被发现可有效协同诱导 Th17 产生 Foxp3 阳性 Tregs。