塩基感受性蛍光色素の開発とその応用

碱敏荧光染料的研制及其应用

• 批准号: 24750158
• 负责人: 下川 浩輝
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24750158/
• 关键词: 蛍光色素; ミトコンドリア; 塩基感受性; 分子内環化反応; イメージング; チエノピリジン環; 蛍光染色; 塩基性顆粒; 蛍光化合物

本研究計画の主要な目的は、1)蛍光プローブの誘導展開、2)誘導展開したプローブを用いてのリンパ球単離、の二つであった。目的1)に関しては平成24年度までに達成しており、構造変換を促すpHを酸性側にまで拡張することは出来なかったが塩基性側ではpH10で蛍光を発する化合物の開発を達成しており、さらに、青から赤までの蛍光を発する誘導体を作成する事にも成功した。2)引き続いて、細胞混合物からの好塩基球の単離す実験に取り掛かった。まずは、ヒト慢性骨髄性白血病由来の幼若好塩基球であるKU812を用いて、その好塩基球への分化前後で染色性に差が出るかどうかを検討した。細胞の分化前後で、pH10に応答する蛍光プローブによって染色される顆粒の数が増加したことから、本蛍光プローブはKU812細胞の分化を見分けているかもしれないと考えられた。本実験の対照として、ヒト好酸球性白血病細胞株であるEoL-1を利用して行った。本細胞株は白血病由来の幼若好酸球であり、ブチル酸刺激によって成熟好酸球へと分化する。本細胞株を用いて同様の実験を行ったところ、分化の前後に関わらず、細胞内の何らかの顆粒が染色される事を見出した。さらに、この現象はリンパ球に限らず、HeLa細胞やNIH3T3、C2C12のような線維芽細胞においても観察された。このことから、本蛍光プローブによって染色される顆粒は、好塩基性顆粒とは異なるものであると考えられた。

该研究计划的主要目的是1）诱导荧光探针，以及2）使用诱导和开发探针的淋巴细胞。目的1）到2012年实现了，无法扩展pH值以促进结构转化为酸性一面，但是基本方面已经实现了荧光化合物的发展，我们成功地创建了发出的衍生物来发出的衍生物来发出衍生物。荧光从蓝色到红色。 2）继续从细胞混合物中尝试良好的盐棒球。首先，我们使用Ku812，这是一群年轻的-young -young -old，它是一种源自人类慢性口服白血病的棒球，检查在分化为良好的盐棒球之前和之后染色是否存在差异。细胞分化之前和之后，由荧光探针染色的颗粒数量增加了，这表明主要的荧光探针可能会区分KU812细胞的分化。与该实验形成鲜明对比的是，进行了人嗜酸性白血病细胞的EOL-1。该细胞菌株是一种源自白血病的年轻嗜酸性嗜酸性粒细胞，通过刺激丁酯通过刺激将其分化为成熟的嗜酸性粒细胞。使用该细胞量进行了类似的实验，并发现细胞中的一些颗粒在分化前后被染色。此外，这种现象不仅在淋巴细胞中观察到，而且在诸如HeLa细胞和NIH3T3和C2C12之类的成纤维细胞中也观察到。由此，认为由主要荧光探针染色的颗粒与基本颗粒不同。