Imaging of DNA damage repair using 53BP1 protein and establishment of therapeutic strategy for cancer treatment.

使用 53BP1 蛋白进行 DNA 损伤修复成像并建立癌症治疗策略。

• 批准号: 23659587
• 负责人: KURIMASA Akihiro
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23659587/
• 关键词: 放射線腫瘍学; バイオセンサー; DNA修復; 細胞周期; 抗がん剤; 放射線

Tumor suppressor p53 Binding Protein 1(53BP1) is recruited rapidly to sites of DNA double-strand breaks (DSBs) and participates in the cellular response to DNA damage. We exploited property of 53BP1 that accumulate in DSB sites and developed biosensor detecting DNA damage using the specical form of 53BP1-GFP fusion protein that could express stably in the cell. Futhermore, we built a system that can identify the difference of cell cycle stage by intranuclear localization patterns of PCNA-DsRed. U2OS cell lines (U2RDP-LE53-21) expressing both these fluorescent fusion proteins make it possible to observe DSBs occurred in different cell cycle stage, these cells remain living. Here, we show how 53BP1 foci are observed in normal culturing conditions, and also how DSBs 53BP1 foci are induced by chemical agents such as Neocarcinostatine (NCS) or DNA Topoisomerase I inhibitor Camptothesin (CPT) that are well-known DSBs inducers. The number of 53BP1 foci was increased by these chemical agents and cell cycle distribution was prolonged compare to cells in normal culture condition. U2OS cell lines may be available for the screening chemotherapy drugs and radiosensitizers that induce DSBs in cancer cells.

肿瘤抑制p53结合蛋白1（53bp1）迅速募集到DNA双链断裂（DSB）的部位，并参与对DNA损伤的细胞反应。我们利用了在DSB位点积聚的53BP1的性质，并使用53BP1-GFP融合蛋白的特定形式开发了生物传感器检测DNA损伤，该蛋白可以在细胞中稳定表达。 Futhermore，我们构建了一个系统，可以通过PCNA-DSRED的核内定位模式来识别细胞周期阶段的差异。表达这两种荧光融合蛋白的U2OS细胞系（U2RDP-LE53-21）使观察到DSB的可能发生在不同的细胞周期阶段，这些细胞保持生命。在这里，我们展示了如何在正常培养条件下观察到53BP1焦点，以及如何由Neocarcinotostatine（NCS）或DNA拓扑酶I抑制剂Camptesin（CPT）等化学剂诱导DSB 53BP1焦点（CPT）。这些化学剂的数量增加了53BP1灶的数量，并且细胞周期分布延长与在正常培养条件下的细胞相比。 U2OS细胞系可能可用于筛选化学疗法药物和诱导癌细胞中DSB的放射敏剂。

项目成果

DNA2本鎖切断損傷ライブセルイメージングによるトポイソメラーゼ阻害剤の薬効評価

利用 DNA 双链断裂损伤活细胞成像评估拓扑异构酶抑制剂的功效

• 发表时间: 2012
• 作者: 堀田絵理香;宮野佳子;岡田茜;矢倉はるな;末岡榮三朗;栗政明弘
• 通讯作者: 栗政明弘

DNA２本鎖切断損傷ライブセルイメージングによるトポイソメラーゼ阻害剤の薬効評価

利用 DNA 双链断裂损伤活细胞成像评估拓扑异构酶抑制剂的功效

• 发表时间: 2012
• 作者: 堀田絵理香;宮野佳子;岡田茜;矢倉はるな;末岡榮三朗;栗政明弘
• 通讯作者: 栗政明弘

U2OS細胞におけるDNA２本鎖切断損傷フォーカスのライブセルイメージングとその動態

U2OS细胞中DNA双链断裂损伤焦点的活细胞成像及其动态

• 发表时间: 2011
• 作者: 栗政明弘;堀田絵理香;富松望;岩淵邦芳;David J. Chen
• 通讯作者: David J. Chen

Live cell imaging and kinetics of DNA double-strand breaks (DSBs) foci in cycling U2OS cells.

循环 U2OS 细胞中 DNA 双链断裂 (DSB) 焦点的活细胞成像和动力学。

• 发表时间: 2012
• 作者: Hotta E;Okada A;Miyano Y;Tomimatsu N;Iwabuchi K;Chen DJ;Kurimasa A
• 通讯作者: Kurimasa A

U2OS細胞におけるDNA2本鎖切断損傷フォーカスのライブセルイメージングとその動態

U2OS细胞中DNA双链断裂损伤焦点的活细胞成像及其动态

• 发表时间: 2011
• 作者: 栗政明弘;堀田絵理香;富松望;岩淵邦芳;David J. Chen
• 通讯作者: David J. Chen