Screening for compounds targeted to novel rapamycin-independent autophagic mechanism

筛选针对新型雷帕霉素依赖性自噬机制的化合物

• 批准号: 23659036
• 负责人: KOZUTSUMI Yasunori
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23659036/
• 关键词: オートファジー; ラパマイシン; 酵母; Ypk1; スクリーニング; セリン・スレオニンキナーゼ

In this grant, we established monitoring system of rapamycin-independent autophagic protein degradation utilizing GFP-tagged Ypk1 localization change under fluorescent microscope. In this assay, inhibitory activity of compounds could be monitored by the loss of vacuolar localization of Ypk1 when vacuolar peptidase deficient strain(pep4Δ) is used.This assay should be utilized along with primary screening system of normal protein degradation, namely Western blotting analysis after SDS-PAGE to monitor the degree of Ypk1 proteolysis. We also screened a set of yeast protein kinase mutant strains to understand the autophagic degradation of Ypk1. This screening was based on the hypothesis that intracellular signaling event is involved in the Ypk1 degradation. We have identified a pair of protein kinase that is responsible of Ypk1 phosphorylation both in vivo and in vitro. Data obtained here will be fundamentally required for future screening to target novel autophagic pathway.

在这项资助中，我们利用荧光显微镜下 GFP 标记的 Ypk1 定位变化建立了雷帕霉素依赖性自噬蛋白降解的监测系统。在该测定中，当液泡肽酶缺陷菌株时，可以通过 Ypk1 液泡定位的丧失来监测化合物的抑制活性。使用 (pep4Δ)。该测定应与正常蛋白质降解的初级筛选系统一起使用，即 SDS-PAGE 后的蛋白质印迹分析以监测程度我们还筛选了一组酵母蛋白激酶突变株来了解 Ypk1 的自噬降解。该筛选基于细胞内信号传导事件参与 Ypk1 降解的假设。负责体内和体外 Ypk1 磷酸化，此处获得的数据对于未来针对新型自噬途径的筛选至关重要。

项目成果

スフィンゴ脂質が関わる免疫抑制とシグナル伝達(化学と生物49(05))

涉及鞘脂的免疫抑制和信号转导（化学与生物学 49（05））

• 发表时间: 2011
• 作者: 竹松弘;小堤保則
• 通讯作者: 小堤保則

Sphingosylphosphorylcholine and lysosulfatide have inverse regulatory function in monocytic cell differentiation into macrophages

鞘氨醇磷酰胆碱和溶血硫苷在单核细胞分化为巨噬细胞中具有反向调节功能

• 发表时间: 2011
• 期刊: Arch Biochem Biophys
• 影响因子: 3.9
• 作者: Yamamoto H;Naito Y;Okano M;Kanazawa T;Takematsu H;Kozutsumi Y
• 通讯作者: Kozutsumi Y

Induction of feline immunodeficiency virus from a chronically infected feline T-lymphocyte cell line

从慢性感染的猫 T 淋巴细胞系中诱导猫免疫缺陷病毒

• DOI: 10.1016/j.rvsc.2011.02.013
• 发表时间: 2012
• 期刊: Res Vet Sci
• 影响因子: 2.4
• 作者: Tochikura TS;Naito Y;Kozutsumi Y;Hohdatsu T
• 通讯作者: Hohdatsu T

スフィンゴ脂質が関わる免疫抑制とシグナル伝達化学と生物

涉及鞘脂的免疫抑制和信号转导化学和生物学

• 发表时间: 2011
• 作者: 竹松弘;小堤保則
• 通讯作者: 小堤保則

Identification of Ypk1 as a novel selective substrate for nitrogen starvation-triggered proteolysis requiring autophagy system and ESCRT machinery components

鉴定 Ypk1 作为氮饥饿触发的需要自噬系统和 ESCRT 机械组件的蛋白水解的新型选择性底物

• 发表时间: 2010
• 期刊: J Biol Chem
• 影响因子: 4.8
• 作者: Shimobayashi M;Takematsu H;Eiho K;Yamane Y;Kozutsumi Y
• 通讯作者: Kozutsumi Y