Ａｍｅｌｏｂｌａｓｔｉｎの癌抑制遺伝子としての働き

成釉细胞蛋白作为抑癌基因的功能

基本信息

批准号：
12J03455
负责人：
安藤俊範
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J03455/
关键词：
ameloblastin osteosarcoma doxorubicin Src Stat3 骨肉腫 Ameloblastin

项目摘要

前年度では、AMBNを安定的に高発現する143B-Luc細胞を樹立し、caspase-3を介したアポトーシスを示すことを明らかにした。今年度はさらに、AMBN安定発現株は、colony形成能と細胞遊走能の低下を示すことを見出した。AMBNの下流シグナルとしてSrcおよびその下流であるStat3経路に着目して検討を行った。骨肉腫細胞株におけるAMBNの発現とSrc-Stat3経路の活性化は負の相関を示しており、AMBN安定発現株においてSrc-Stat3経路が不活性化していることを見出した。そこで、AMBN安定発現株に恒常的活性化型Src（Src-Y527F）を過剰発現させると、Stat3の再活性化が認められるとともに、アポトーシスの抑制、colony形成能および細胞遊走能の亢進が認められた。In vivoマウスモデルでは、コントロールの143B-Luc細胞と、AMBN安定発現株をマウスの足に接種すると、AMBN群では原発巣での腫瘍増大の抑制および肺転移の低下が見られた。さらに、AMBN安定発現株に抗がん剤のドキソルビシン（Dox）を作用させると、コントロールと比較して顕著なアポトーシスの増加が観察され、この増加はSrc-Y527Fの過剰発現によって抑制された。またNOS-1細胞（AMBN高発現細胞株）で、AMBNの発現をknockdownし、caspase-3を介したアポトーシスの抑制、遊走能の亢進、Doxに対する感受性の低下が認められた。また143B-Luc細胞にSrcおよびStat3阻害薬を投与すると、AMBN安定発現株の結果を模倣した。以上より、AMBNがSrc-Stat3の抑制を介して骨肉腫の増殖進展を抑制し、Doxに対する感受性を亢進することが明らかとなり、AMBNの発現を指標とした悪性度診断やDoxとの併用によるAMBNの治療への応用の可能性が示された。

去年，我们建立了稳定、高表达AMBN的143B-Luc细胞，并证明它们表现出caspase-3介导的细胞凋亡。今年，我们还发现稳定表达AMBN的菌株表现出集落形成和细胞迁移能力降低。我们重点关注 Src 及其下游 Stat3 通路作为 AMBN 的下游信号。我们发现骨肉瘤细胞系中AMBN的表达和Src-Stat3通路的激活呈负相关，并且在稳定表达AMBN的细胞系中Src-Stat3通路失活。因此，当在稳定表达AMBN的菌株中过表达组成型激活的Src（Src-Y527F）时，观察到Stat3重新激活，以及细胞凋亡的抑制以及集落形成能力和细胞迁移能力的增强。在体内小鼠模型中，当将对照 143B-Luc 细胞和稳定的 AMBN 表达菌株接种到小鼠足部时，AMBN 组显示出原发肿瘤的肿瘤生长受到抑制并减少了肺转移。此外，当将抗癌药物阿霉素（Dox）应用于稳定表达AMBN的菌株时，与对照相比，观察到细胞凋亡显着增加，并且这种增加被Src-Y527F的过表达所抑制。此外，在NOS-1细胞（AMBN高表达的细胞系）中，AMBN表达被敲低，caspase-3介导的细胞凋亡受到抑制，迁移能力增强，对Dox的敏感性降低。此外，对 143B-Luc 细胞施用 Src 和 Stat3 抑制剂模拟了 AMBN 稳定表达系的结果。由上可知，AMBN通过抑制Src-Stat3来抑制骨肉瘤的生长和进展，并提高对Dox的敏感性，从而证明了其应用于治疗的可能性。