IFNγ遺伝子治療最適化のためのIFN-γ時空間分布の制御

控制 IFN-γ 时空分布以优化 IFNγ 基因治疗

基本信息

批准号：
12J02931
负责人：
安藤満
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、持続的なIFNγ供給による治療抵抗性慢性C型肝炎治療の有効性を検証した。検証には一過性の遺伝子発現が得られるプラスミド骨格と持続的な遺伝子発現が得られるプラスミド骨格に、ヒトIFNγcDNAを挿入することで2種類のヒトIFNγ発現プラスミドを用いた。検証には、HCVlb型感染ヒト肝細胞キメラマウスにヒトIFNγ発現プラスミドを用いて遺伝子導入し、ヒトIFNγ発現による抗HCV効果を評価した。C型肝炎モデルマウスに一過性ヒトIFNγ発現プラスミドを遺伝子導入したところ、評価に用いた全てのマウスから観察期間終了時にHCVRNAが検出された。その一方で、持続型ヒトIFNγ発現プラスミドを遺伝子導入したC型肝炎モデルマウスにおいては、ヒトIFNγ発現が非常に低い1例を除き、6例中5例のマウスにおいて長期に渡り血清中、および、肝臓中HCVRNAの除去に成功した。以上のことから、治療抵抗性C型肝炎治療に対しては、ヒトIFNγを持続的に供給することが有効な治療手段となりうることが示された。また、腫瘍血栓を標的とすることで、1FNγの腫瘍選択的デリバリー法の開発を試みた。腫瘍血栓指向性の賦与には血栓指向性ペプチドであるCREKAを選択し、これを融合したIFNγ-CREKA発現プラスミド、また、腫瘍特異的にIFNγとCREKAが切断されるIFNγ-MMP-CREKA発現プラスミドを構築した。固形腫瘍モデルマウスを用いて、構築したプラスミドを遺伝子導入し、その治療有効性を評価した結果、IFNγ-CREKA発現プラスミド投与群と天然型IFNγ発現プラスミド投与群の腫瘍サイズに有意差は認められなかった。一方で、IFNγ-MMP-CREKA発現プラスミド投与群では、天然型IFNγ発現プラスミド投与群と比較して、有意に高い腫瘍サイズの減少が認められた。

今年，我们验证了通过持续供应IFNγ治疗难治性慢性丙型肝炎的有效性。使用两种类型的人IFNγ表达质粒进行验证，其中人IFNγcDNA插入允许瞬时基因表达的质粒主链和允许持续基因表达的质粒主链。为了验证，用人IFNγ表达质粒转染感染HCV1b型的人肝细胞嵌合小鼠，并评价人IFNγ表达的抗HCV效果。当将瞬时人IFNγ表达质粒引入丙型肝炎模型小鼠时，在观察期结束时用于评估的所有小鼠中均检测到HCVRNA。另一方面，在转染持久性人IFNγ表达质粒的丙型肝炎模型小鼠中，6只小鼠中有5只具有长期血清和肝脏中的HCVRNA。由此可见，持续供给人IFNγ可以成为治疗难治性丙型肝炎的有效治疗手段。我们还尝试开发一种针对肿瘤血栓的 1FNγ 肿瘤选择性递送方法。为了赋予肿瘤血栓趋向性，我们选择了促血栓肽CREKA，并使用与其融合的IFNγ-CREKA表达质粒，以及以肿瘤特异性方式切割IFNγ和CREKA的IFNγ-MMP-CREKA表达质粒。将构建的质粒转染至实体瘤模型小鼠并评价其治疗效果，结果发现IFNγ-CREKA表达质粒施用组和天然IFNγ表达质粒施用组之间的肿瘤大小没有显着差异。另一方面，与天然IFNγ表达质粒施用组相比，在IFNγ-MMP-CREKA表达质粒施用组中观察到肿瘤大小显着更高的减小。