C型慢性肝炎のインターフェロン治療抵抗性とHCV遺伝子変異との関連

慢性丙型肝炎干扰素治疗耐药与HCV基因突变的关系

• 批准号: 12770286
• 负责人: 村島 史朗
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770286/
• 关键词: インターフェロン; 慢性C型肝炎; 治療抵抗性; 2',5'-OAS

現在治療抵抗性とそうでない慢性C型肝炎のCORE蛋白とNS5A蛋白をHuh7,HepG2,Hep3Bといった肝細胞癌由来のセルラインにトランスフェクトしており、細胞に遺伝子を移入するベクターが恒常的に細胞に発現していることを確認している。現在CORE蛋白とNS5A蛋白がどの程度実際に発現しているかウェスタンブロッティング法にて定量中である。今後インターフェロントランスダクションに関連した蛋白の発現を、mRNA段階ではCATアッセイもしくはルシフェラーゼアッセイで確認する。この際インターフェロンの影響を確認するため段階濃度でそれぞれの抗ウイルス蛋白の発現を測定する。また同時にNS5A蛋白がどの様な機序で細胞内で作用しているかを明らかにする。またこれらのHCV蛋白がインターフェロン投与の際ウイルス排除に重要な役割を果たしていると考えられている2′,5′-OAS, PKR, Mx蛋白等の抗ウイルス物質が産生されるが、現在NS5A蛋白がPKRを直接阻害することがin vitroの実験で示されておりこれがインターフェロン治療抵抗性の重要な機序の一つであると考えられている。既に我々は2′,5′-OAS,がウイルスのNS5蛋白の影響を強く受けていることをヨーロッパの雑誌やアメリカでの学会で発表してきたが現在肝癌細胞株にNS5A蛋白を発現させ、どの様な機序で抗ウイルス蛋白である2′,5′-OASやPKRが抑制されるか検討中である。

目前，慢性肝炎的核心蛋白和NS5A蛋白目前尚不抵抗治疗且不存在，已被转染到源自肝细胞癌的细胞系中，例如HUH7，HEPG2和HEP3B，并且已经确认将基因转移到细胞中的细胞中，并且已经证实了该细胞中的细胞是组成型表达细胞的。目前，通过蛋白质印迹来量化核心蛋白和NS5A蛋白的核心蛋白和NS5A蛋白的程度。将来，使用CAT或荧光素酶测定法在mRNA期间将确认与干扰素转导相关的蛋白质的表达。在这种情况下，为了确认干扰素的作用，在阶段浓度下测量每种抗病毒蛋白的表达。同时，我们将阐明NS5A蛋白在细胞内作用的机制。此外，产生抗病毒物质，例如2'，5'-OAS，PKR和MX蛋白，这些蛋白被认为在干扰素给药时被认为在消除病毒中起重要作用，但体外实验表明NS5A蛋白直接抑制PKR，并且认为这是一种重要的抗毒性机构的毒性，这是一种重要的机构。我们已经在欧洲杂志和美国会议上介绍了2'，5'-OA受病毒NS5蛋白的强烈影响，但是我们目前正在考虑如何通过在肝癌细胞中表达NS5A蛋白来抑制2'，5'-OAS和PKR的抗病毒蛋白。

项目成果

村島史朗, 佐田通夫: "消化器ナビゲーター"慢性肝炎""メディカルレビュー社(in press).

Shiro Murashima、Michio Sada：“胃肠导航仪‘慢性肝炎’”医学评论公司（正在出版）。

Shiro Murashima et al.: "Effect of interferon treatment on serum 2,5,-OAS levels in HCV infected patients"Journal of Medical Virology. 62. 185-190 (2000)

Shiro Murashima 等人：“干扰素治疗对 HCV 感染患者血清 2,5,-OAS 水平的影响”医学病毒学杂志。

Shiro Murashima: "Effect of interferon treatment on serum 2',5'-oligoadenylate synthetase levels in hepatitis C-infected patients."Journal of Medical Virology. 62・2. 185-190 (2000)

Shiro Murashima：“干扰素治疗对丙型肝炎感染患者血清 2,5-寡腺苷酸合成酶水平的影响。”医学病毒学杂志 62・2 (2000)。