Development of Therapy for Spinal Muscular Atrophy Based on the Spliring Modulation Technology

基于Spliring调制技术的脊髓性肌萎缩症治疗方法研究进展

基本信息

批准号：
18591151
负责人：
NISHIO Hisahide
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18591151/
关键词：
spinal muscular atrophy the SMN1 gene the SMN2 gene thetic exon-specific splicing activator valproic acid ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤転写効率スプライシング効率エクソン7 スプライシングペプチド核酸遺伝子変異 Tudorドメイン

项目摘要

1. (Background) More than 90% of patients with spinal muscular atrophy (SMA) are homozygous for SMN1 deletion. However, SMN2 is retained in such patients. SMN2 is an almost identical gene to SMN1 and codes the same protein as SMN1 does. The main product of SMN2 is a transcript lacking exon7, producing truncated SMN protein. That is the reason why SMN2 cannot compensate the loss of SMNI in most SMA patients. A single nucleotide change in exon 7, 6C in SMN1 and 6T in SMN2, makes the splicing difference between them. Correction of the exon 7 splicing of SMN2 is now considered as a treatment strategy for SMA.2. (Synthetic exon-specific splicing activator) Based on the report of Cartegni, et. al., we synthesized a peptide nucleic acid, SMN-PNA (ESSENCE), which may activate splicing of SMN2 exon 7. SMN-PNA had SMN2 exon 7 binding domain and serine-arginine repeat domain. Our study using fibroblast cell line from an SMA patient did not show at all that SMN-PNA corrected the splicing pattern, while in-vitro splicing assay with SMN2EX6-7 plasmid showed some effects on the splicing pattern.3. (Splicing modulating drug) Valproic acid (VPA) is widely used as an antiepileptic drug. Recently, it has been reported that VPA may increase SMN2 expression and alter its splicing pattern. We tested whether VPA can increase SMN2 gene expression in the fibroblasts from our SMA patients. The effect of VPA (concentration of 0.5-1000 μM) on total transcription level and exon 7-splicing pattern of SMN2 in the fibroblasts was evaluated by quantitative PCR method. VPA did not alter significantly the total transcription level and splicing pattern of SMN2 in this study, suggesting that there are non-responders to VPA treatment.

1.（背景）超过 90% 的脊髓性肌萎缩症 (SMA) 患者是 SMN1 缺失的纯合子，然而，SMN2 与 SMN1 几乎相同，并且编码与 SMN1 相同的蛋白质。 SMN2的主要产物是缺乏外显子7的转录物，产生截短的SMN蛋白，这就是SMN2无法补偿大多数SMA患者SMNI缺失的原因。 SMN1中的外显子7、6C和SMN2中的6T的核苷酸变化，使得它们之间的剪接差异，现在被认为是基于SMA.2（合成外显子特异性剪接激活剂）的治疗策略。根据Cartegni等人的报告，我们合成了一种肽核酸SMN-PNA（ESSENCE），它可以激活SMN2 外显子 7。SMN-PNA 具有 SMN2 外显子 7 结合域和丝氨酸-精氨酸重复域。我们使用来自 SMA 患者的成纤维细胞系进行的研究根本没有表明 SMN-PNA 纠正了剪接模式，而体外剪接测定则如此。带有SMN2EX6-7质粒的剪接模式显示出一些影响。3.（剪接调节药物）丙戊酸（VPA）被广泛用作最近，有报道称 VPA 可能会增加 SMN2 的表达并改变其剪接模式，我们测试了 VPA 是否可以增加 SMA 患者的成纤维细胞中的 SMN2 基因表达（浓度为 0.5-1000 μM）。通过定量PCR方法评估了成纤维细胞中SMN2的总转录水平和外显子7剪接模式，VPA没有显着改变总转录。本研究中 SMN2 的水平和剪接模式表明存在对 VPA 治疗无反应的人。

项目成果

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专利数量（0）

Deletion analyses of SMN1 and NAP genesin Malaysian spinal muscular atrophy patients

马来西亚脊髓性肌萎缩症患者SMN1和NAP基因缺失分析

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Watihayati; MS; Zabidi
通讯作者：
Zabidi

Zilfalil BA. Deletion analyses of SMN1 and NAIP genes in Malaysian spinal muscular atrophy patients.

齐法利尔 BA。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Watihayati MS; Zabidi
通讯作者：
Zabidi

A novel mutation at the N-terminal of SMN Tudor domain inhibits its interaction with target proteins.

SMN Tudor 结构域 N 端的新突变抑制其与靶蛋白的相互作用。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kotani T; Sutomo R; Sasongko TH; Sadewa AH; Gunadi; Minato T; Fujii E; Endo S; Lee MJ; Ayaki H; Harada Y; Matsuo M; Nishio H.
通讯作者：
Nishio H.

Deletion analyses of SMN1 and NAIP genes in Malaysian spinal muscular atrophy patients.

马来西亚脊髓性肌萎缩症患者 SMN1 和 NAIP 基因的缺失分析。