Purification and functional analysis of YhaTU system, a two component K+/H+ antiporter from Bacillus subtilis

枯草芽孢杆菌双组分 K/H 逆向转运蛋白 YhaTU 系统的纯化和功能分析

基本信息

批准号：
23770156
负责人：
FUJISAWA Makoto
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Toyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

Bacillus subtilis YhaTU system is a K+/H+ antiporter which consists from two components, the hydrophilic ancillary protein YhaT and the membrane-embedded YhaU. The YhaTU system is not only a unique cation proton antiporter but also an interesting enzyme in respect of the evolution of ion antiporter from ion channel. In In this study, purification of the YhaTU system and cloning the genes which have point mutations at the various points of the genes have been tried.To purify the YhaTU complex, StrepTagII and His6 tags were introduced at N-terminal or C-terminal of the proteins. Fifty six mutations were also introduced into the genes to test the function of each amino acid residues. Now the basis to analyze the detail function of YhaTU has been constructed.

枯草芽孢杆菌YHATU系统是K+/H+抗植物，由两个成分组成，分别是亲水性辅助蛋白YHAT和膜上包含的Yhau。 Yhatu系统不仅是独特的阳离子质子抗植物，而且是离子抗胞源从离子通道的进化方面的有趣酶。在这项研究中，已经尝试了在基因的各个点上具有点突变的基因的纯化和克隆基因。在N末端或C末端引入了Yhatu复合物，链球菌和His6标签。蛋白质。还将56个突变引入基因中，以测试每个氨基酸残基的功能。现在，已经构建了分析Yhatu细节功能的基础。

项目成果

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专利数量（0）

プルダウンアッセイとブルーネイティブゲル電気泳動法による枯草菌のK+/H+アンチポーターYhaTUシステムの複合体の検出

通过 Pull-down 测定和蓝色非变性凝胶电泳检测枯草芽孢杆菌 K+/H+ 逆向转运蛋白 YhaTU 系统复合物

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
高田浩志;山田康之;木田祐一郎;藤澤　誠
通讯作者：
藤澤　誠

Detection of interaction between subunits of a two-component K^+/H^+.

检测双组分 K^ /H^ 的亚基之间的相互作用。

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
Toru Ishikawa;Yasuyuki Kato-Yamada;Makoto Fujisawa
通讯作者：
Makoto Fujisawa

Purification of YhaTU system, a K^+/H^+ a ntiporter from Bacillus subtilis.

YhaTU 系统的纯化，来自枯草芽孢杆菌的 K^ /H^ 反向转运蛋白。

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kentaro Kato;Yu Tanaami;Makoto Fujisawa
通讯作者：
Makoto Fujisawa

プルダウンアッセイとブルーネイティブゲル電気泳動法による枯草菌のK^+/H^+アンチポーターYhaTUシステムの複合体の検出

通过pull-down实验和蓝色天然凝胶电泳检测枯草芽孢杆菌K^+/H^+逆向转运蛋白YhaTU系统复合物。

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
青山智英子、杉本博之、安戸博美;山下智子、堀端康博;杉本さやか、佐藤元康;Masayuki Hara,Sachiko Yanagisawa,Hiroshi Sugimoto,Yoshitsugu Shiro,Takashi Ogura;姜公秀;田邊賢司;Makoto Fujisawa;Takashi Nomura,Sachiko Yanagisawa,Kyoko Shinzawa-Ito,Shinya Yoshikawa,Takashi Ogura;Kida Yuichiro;藤澤誠
通讯作者：
藤澤誠

Detection of YhaTU complex, a Two-Component K+/H+ Antiporter from Bacillus subtilis, by Pull-down Assay and Blue Native PAGE.

通过 Pull-down 分析和 Blue Native PAGE 检测 YhaTU 复合物（来自枯草芽孢杆菌的双组分 K /H 逆向转运蛋白）。

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
Masayuki Hara;Sachiko Yanagisawa;Hiroshi Sugimoto;Yoshitsugu Shiro;Takashi Ogura;Sakaue Haruka;Makoto Fujisawa
通讯作者：
Makoto Fujisawa