ヒト核内受容体すべてをスクリーニング可能な万能蛍光トレーサーの開発

开发可筛查所有人类核受体的通用荧光示踪剂

• 批准号: 11J03966
• 负责人: 巣山 慶太郎
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J03966/
• 关键词: 核内受容体; 受容体結合試験; 蛍光トレーサー; ビスフェノール

遺伝子の転写因子である核内受容体はホルモン等のリガンドが結合することによって活性化され、標的遺伝子の転写を促進する。一方、内分泌撹乱物質はこれらの核内受容体に結合して受容体応答を無秩序に誘起、あるいは遮断する。このため、ヒト核内受容体48種全てに対する特異的な結合を評価するための「受容体結合試験」の実施が必要である。受容体結合試験には標準化合物として、放射標識化合物が一般的に適用されている。一方、近年では蛍光標識化合物を用いる受容体結合試験も確立された。核内受容体に関する研究が進展するなか、最近になって、複数の受容体に結合する「非選択的リガンド」が見られるようになった。そこで、こうした化合物を結合核として蛍光標識化合物が調製できれば、多くの受容体に適用可能な万能型の受容体結合試験のトレーサーとすることができるのでは?との可能性を着想するに至った。そして、複数の核内受容体に結合するビスフェノールC(BPC)を蛍光標識した万能型トレーサー候補化合物を合成し、ERをはじめとする核内受容体の競合結合試験系の確立を試みた。前年度にはBPCを蛍光標識した7種類の蛍光プローブの合成を実施した。合成した蛍光プローブの核内受容体への結合親和性を調べたところ、ERαとERβに強く結合したが、ERRγおよびCARに対する親和性は著しく低下していた。そこでERに対する結合試験の構築を試み、メチレン数n=6のリンカーを持つプローブをトレーサーとして試験の条件設定に成就した。この試験系は非常に高感度であり、かつ専用の設備・施設を必要としない簡便性に優れた試験法として確立することができた。これは核内受容体に対する新規な内分泌撹乱化学物質探索のための簡便かつ迅速な試験法として非常に有用である。また、ERRγおよびCARに対してもプローブの改良によりこの試験を適用できる可能性が示された。

核受体是基因转录因子，通过诸如激素等配体的结合并促进靶基因的转录来激活。另一方面，内分泌干扰物与这些核受体结合，并以不规则的方式诱导或阻断受体反应。因此，有必要进行“受体结合测试”，以评估与所有48种人类核受体的特定结合。放射性标记化合物通常用作受体结合测试的标准化合物。另一方面，近年来，还建立了使用荧光标记化合物的受体结合试验。随着对核受体的研究的进行，最近发现“非选择性配体”与多种受体结合。因此，我们想到的是，如果可以使用这些化合物作为结合核制备荧光标记的化合物，则可以用作可以应用于许多受体的通用受体结合测试示踪剂。然后，我们与双酚C（BPC）的荧光标记合成了通用的示踪剂化合物，该化合物与多个核受体结合，并试图建立用于包括ER在内的核受体的竞争性结合测试系统。在上一年，与BPC的荧光标记合成了七种类型的荧光探针。当研究合成的荧光探针的结合亲和力与核受体时，发现它们与ERα和ERβ密切结合，但它们对ERRγ和CAR的亲和力显着降低。因此，我们试图为ER构建结合测试，并使用带有甲基数为n = 6的甲基数为示踪剂的甲基数的探针实现了测试的条件设置。该测试系统是一种非常敏感的测试方法，非常方便，不需要专门的设备或设施。这是一种方便且快速的测试方法，可用于寻找新型内分泌破坏核受体的化学物质。还已经表明，该测试可以通过改进的探针应用于ERRγ和CAR。

项目成果

蛍光標識ビスフェノールCのヒト核内受容体結合試験プローブとしての汎用性

荧光标记双酚 C 作为人类核受体结合测试探针的多功能性

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

内分泌撹乱物質探索のための受容体結合試験に用いる新規蛍光性プローブの開発

开发用于受体结合测试的新型荧光探针以检测内分泌干扰物

• 发表时间: 2013
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

NBD標識ビスフェノールC:新規蛍光性プローブを用いた核内受容体結合試験系の開暃

NBD标记的双酚C：使用新型荧光探针开发核受体结合测试系统

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

核内受容体結合試験における蛍光プローブ・NBD標識ビスフェノールC

核受体结合试验中的荧光探针/NBD标记双酚C

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

リガンド結合ポケットに遊離システインを含む核内受容体RXRに結合する化学物質の探索

寻找与核受体RXR结合的化学物质，其配体结合口袋中含有游离的半胱氨酸

• 发表时间: 2011
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山慶太郎
• 通讯作者: 巣山慶太郎