ヒト核内受容体すべてをスクリーニング可能な万能蛍光トレーサーの開発

开发可筛查所有人类核受体的通用荧光示踪剂

• 批准号: 11J03966
• 负责人: 巣山 慶太郎
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J03966/
• 关键词: 核内受容体; 受容体結合試験; 蛍光トレーサー; ビスフェノール

遺伝子の転写因子である核内受容体はホルモン等のリガンドが結合することによって活性化され、標的遺伝子の転写を促進する。一方、内分泌撹乱物質はこれらの核内受容体に結合して受容体応答を無秩序に誘起、あるいは遮断する。このため、ヒト核内受容体48種全てに対する特異的な結合を評価するための「受容体結合試験」の実施が必要である。受容体結合試験には標準化合物として、放射標識化合物が一般的に適用されている。一方、近年では蛍光標識化合物を用いる受容体結合試験も確立された。核内受容体に関する研究が進展するなか、最近になって、複数の受容体に結合する「非選択的リガンド」が見られるようになった。そこで、こうした化合物を結合核として蛍光標識化合物が調製できれば、多くの受容体に適用可能な万能型の受容体結合試験のトレーサーとすることができるのでは?との可能性を着想するに至った。そして、複数の核内受容体に結合するビスフェノールC(BPC)を蛍光標識した万能型トレーサー候補化合物を合成し、ERをはじめとする核内受容体の競合結合試験系の確立を試みた。前年度にはBPCを蛍光標識した7種類の蛍光プローブの合成を実施した。合成した蛍光プローブの核内受容体への結合親和性を調べたところ、ERαとERβに強く結合したが、ERRγおよびCARに対する親和性は著しく低下していた。そこでERに対する結合試験の構築を試み、メチレン数n=6のリンカーを持つプローブをトレーサーとして試験の条件設定に成就した。この試験系は非常に高感度であり、かつ専用の設備・施設を必要としない簡便性に優れた試験法として確立することができた。これは核内受容体に対する新規な内分泌撹乱化学物質探索のための簡便かつ迅速な試験法として非常に有用である。また、ERRγおよびCARに対してもプローブの改良によりこの試験を適用できる可能性が示された。

核受体是一种基因转移因子，被激素等配体激活，并促进靶基因的转录。另一方面，内分泌干扰物质与这些核受体结合，以诱导或阻断受体反应。因此，有必要进行“受体组合测试”，以评估与所有48种人类核受体的特定键。辐射化合物通常在受体领带试验中作为标准化合物施加。另一方面，近年来，已经建立了使用荧光标记化合物的受体集成检查。随着最近对核受体的研究，已经看到了与多个受体结合的“非选择性配体”。因此，如果可以作为结合核制备此类化合物，则可以将其用于所有可刺激性受体测试的示踪剂，可以应用于许多受体。然后，试图建立包括ER在内的核受体的竞争者，试图建立与多个核受体结合的荧光 - 签名双酚C（BPC）的通用示踪剂候选化合物。在上一年，将七种类型的荧光探针与用BPC标记的荧光合成。检查合成荧光探针与核中细胞核受体的结合亲和力，它与ERα和ERβ强烈结合，但是对ERRγ和CAR的亲和力显着降低。因此，我们尝试为ER构建组合测试，并使用带有甲基号n = 6的接头的探针将测试条件设置作为示踪剂。测试系统非常敏感，可以作为一种出色的测试方法确定，不需要专用的设施和设施。这是一种简单而迅速的测试方法，可用于寻找用于核受体的新内分泌干扰化学物质。还表明，该测试也可以通过改进探针来应用于ERRγ和CAR。

项目成果

蛍光標識ビスフェノールCのヒト核内受容体結合試験プローブとしての汎用性

荧光标记双酚 C 作为人类核受体结合测试探针的多功能性

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

内分泌撹乱物質探索のための受容体結合試験に用いる新規蛍光性プローブの開発

开发用于受体结合测试的新型荧光探针以检测内分泌干扰物

• 发表时间: 2013
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

NBD標識ビスフェノールC:新規蛍光性プローブを用いた核内受容体結合試験系の開暃

NBD标记的双酚C：使用新型荧光探针开发核受体结合测试系统

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

核内受容体結合試験における蛍光プローブ・NBD標識ビスフェノールC

核受体结合试验中的荧光探针/NBD标记双酚C

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

リガンド結合ポケットに遊離システインを含む核内受容体RXRに結合する化学物質の探索

寻找与核受体RXR结合的化学物质，其配体结合口袋中含有游离的半胱氨酸

• 发表时间: 2011
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山慶太郎
• 通讯作者: 巣山慶太郎