Modification of rattle snake venom derived blood clot dissolver, Alfimeprase, by fusion with C-terminal domain of habu-HR1a and fibrin-targeting peptide

通过与 habu-HR1a 的 C 端结构域和纤维蛋白靶向肽融合，对响尾蛇毒液衍生的血栓溶解剂 Alfimeprase 进行修饰

• 批准号: 23590199
• 负责人: ISHIDA Isao
• 金额: $ 3.41万
• 依托单位: Teikyo Heisei University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23590199/
• 关键词: バイオテクノロジー; タンパク質; 酵素; 血栓溶解剤; フィブリン分解活性; 遺伝子組み換えタンパク質; 組換えDNA; フィブリン分解; 遺伝子組み換え

Alfimeprase(A) can digest fibrin directly, and do not produce any plasmin in different from tPA (Activase). Because A can be rapidly trapped by alpha-2 macroglobulin (alfpha-2M) and inactivated in the blood vein, the clinical effect of A in the phase 2 has not been so good to advance its development. We designed the gene in which the C-terminal side of the A was fused with the C-terminal domain (collagen-binding domain) of the HR1a. Considering targeting to fibrin clots, the C-terminal side of the AH gene was fused with the gene for the human plasminogen-derived kringle domain 1 region, which fusion protein is called AHP. The A, AH and AHP genes were inserted into the pE-SUMO vectors and were expressed in the E.coli BL21(DE3)star. Fusion of the HR1a C-teriminal domain with A did not have any effect in terms of avoiding of inactivation by alpha-2M regardless of the presence or absence of the N-terminal SUMO-peptide.

AlfimePrase（a）可以直接消化纤维蛋白，并且不会在与TPA（Activase）不同的情况下产生任何纤溶酶。 因为A可以被Alpha-2巨球蛋白（alfpha-2m）迅速捕获并在血脉中灭活，因此A阶段A中A的临床效应并不是很好地推进其发育。 我们设计了一个基因，其中A的C末端与HR1A的C末端结构域（胶原结合结构域）融合在一起。 考虑到靶向纤维蛋白凝块，将AH基因的C末端侧与人纤溶酶衍生的Kringle域1区域的基因融合在一起，该区域称为AHP。 A，AH和AHP基因被插入PE-SUMO载体中，并在E.Coli BL21（DE3）恒星中表达。 HR1A C-膜中拟合与A的融合在避免α-2M失活的情况下没有任何影响，而不管N末端SUMO肽的存在或不存在。

项目成果

嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発ー細胞・分子レベルでの解析

利用厌氧菌作为药物输送载体开发实体癌新治疗方法——细胞和分子水平分析

• 作者: 西川毅;石田功他
• 通讯作者: 石田功他

非水溶性フラーレン及び水溶性フラーレンの薬物に対する相互作用の検討

水不溶性和水溶性富勒烯的药物相互作用的检查

• 发表时间: 2011
• 作者: 小島 祐子;富田 潤;池田 佳子;関野 浩一;中川 沙織;大和 進;油布朋子
• 通讯作者: 油布朋子

Generation of TRAIL-receptor 1-specific human monoclonal antibodies by a combination of immunospot array assay on a chip and human Ab-producing mice

通过芯片上的免疫点阵列测定和产生人抗体的小鼠相结合来产生 TRAIL 受体 1 特异性人单克隆抗体

• 发表时间: 2010
• 期刊: Eur. J. Immunol
• 作者: Jin A;Ozawa T;Tajiri K;Lin Z;Obata T;Ishida I;Kishi H and Muraguchi A
• 通讯作者: Kishi H and Muraguchi A

2022年を見据えた研究テーマ発掘の実践ノウハウ集

着眼 2022 年发现研究主题的实用知识集合

• 发表时间: 2012
• 作者: 花谷忠昭;佐井君江;頭金正博;瀬川勝智;木村通男;堀雄史;川上純一;斎藤嘉朗;石田 功（分担）
• 通讯作者: 石田 功（分担）

昆虫培養細胞における無血清培地を用いた組換え蛋白質発現細胞の作製

在培养的昆虫细胞中使用无血清培养基产生重组蛋白表达细胞

• 发表时间: 2013
• 作者: 高石明那;長谷井智也;神谷力嗣;前田恭央子;下枝里佳子;杉田真美;吉江唯菜;西川毅;石田功
• 通讯作者: 石田功