分子生物学的手法を用いた遺伝性骨系統疾患原因遺伝子の機能病態解析

利用分子生物学方法对遗传性骨病致病基因进行功能和病理分析

• 批准号: 16790847
• 负责人: 光安 廣倫
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790847/
• 关键词: 線維芽細胞増殖因子受容体3; 軟骨無形成症; 機能解析

平成18年度実施した実験内容について示す。昨年度に引き続き、軟骨無形性症を代表とする遺伝性骨系統疾患の原因遺伝子である線維芽細胞増殖因子受容体3 Fibroblast Growth Factor Receptor 3(FGFR3)の遺伝子変異に関する機能解析をすすめた。FGFR3正常株、変異株(軟骨無形性症遺伝子変異)の発現系の構築:整形外科領域で重要な軟骨細胞での異常について機能解析を試みるためにマウステラトーマ細胞株であるATDC5細胞株、ラット軟骨肉腫細胞株であるRCS細胞株、ヒト軟骨肉腫細胞株であるOUMS細胞株を用いて変異株の発現系の構築を試みた。発現を評価するためにFGFR-3抗体を用いた免疫染色を行い、またbFGFを用いた変異株の表現型の変化について検討を行った。しかし前年度報告したように軟骨肉腫細胞株については、それぞれの細胞株の成熟度と細胞が出す細胞外マトリックスのために遺伝子導入が困難であり、発現は認められたものの、表現型での正常株との差は認められなかった。これについては発現量の問題なのかを現在検討している。ATDC5細胞株についてはTransient expressionを行い、軟骨の成熟段階での正常株、変異株での変化をみるように解析をすすめた。発現量の調整が困難であり、定量的な解析は現時点で出来てはいないが、変異株での軟骨細胞の増殖が遅延している結果を得た。前述のように、定量的解析が出来ていないため、現在でも解析を継続している。

2006年进行的实验内容如下所示。继去年之后，我们对成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）的基因突变进行了功能分析，FGFR3是软骨发育不全等遗传性骨病的致病基因。 FGFR3正常株和突变株（软骨形成基因突变）表达系统的构建：为了尝试对骨科领域重要的软骨细胞异常进行功能分析，我们使用了ATDC5细胞系、小鼠畸胎瘤细胞系和大鼠软骨我们尝试使用 RCS 细胞系（一种肉瘤细胞系）和 OUMS 细胞系（一种人软骨肉瘤细胞系）构建突变表达系统。为了评估表达，我们使用FGFR-3抗体进行免疫染色，并使用bFGF检查突变株的表型变化。然而，正如去年报道的那样，由于每种细胞系的成熟水平和细胞产生的细胞外基质，将基因导入软骨肉瘤细胞系很困难，尽管观察到表达，但表型之间没有观察到差异。股票和股票。我们目前正在调查这是否是表达水平的问题。我们在 ATDC5 细胞系上进行瞬时表达，并分析正常细胞系和突变细胞系在软骨成熟阶段的变化。尽管目前很难调节表达水平并且无法进行定量分析，但我们得到了突变株中软骨细胞增殖延迟的结果。如上所述，定量分析还无法实现，因此分析仍在进行中。