カゼインホスホペプチドのIgA産生増強作用に関与する細胞及びレセプター分子の解明

阐明参与酪蛋白磷酸肽 IgA 产生增强作用的细胞和受体分子

基本信息

批准号：
15780174
负责人：
河原岳志
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、乳カゼインのトリプシン消化により生じる機能性ペプチド「カゼインホスホペプチド(CPP)」の免疫増強作用に関与する受容体の特定を目的として以下の知見を得た。まず、マウス脾臓細胞培養系においてCPPに直接作用するサブセットを明らかにするため、磁気細胞分離システム(MACS)を用いて、CD4^+、CD8^+、CDI9^+の細胞集団をそれぞれ分離し、各集団に対するCPPの作用について検討を行った。その結果、特にCD19^+細胞集団の細胞増殖応答およびサイトカイン発現(IL-6等)に有意な促進作用が観察され、これらの作用がCPPのIgA促進作用に重要な影響を果たしているものと推察された。そこで、同様の作用を持つB細胞マイトージェンの受容体であるToll-like receptor (TLR)に着目し、TLR2、TLR4、TLR9のシグナル伝達阻害抗体存在下でのCPPの作用について検討を行ったところ、抗TLR4抗体存在下では細胞増殖応答、サイトカイン発現がともに阻害されることが明らかとなった。CPPの活性に対するTLR4の関与は、TLR4に遺伝的点変異をもち、シグナル伝達を欠損しているC3H/HeJ系マウス脾臓由来のB細胞培養系においてCPPの作用が観察されないことからも示唆された。TLR4はグラム陰性細菌の構成成分であるリポ多糖(LPS)の受容体として知られており、試料中のLPS混入により、誤った報告が過去に多くなされていると指摘されている背景がある。そこでLPSの活性阻害物質であるポリミキシンB存在下でのCPPの作用についてさらに確認を行ったところ、活性に影響は観察されないことが示された。また、本実験で用いた試料をLPS検出試薬であるリムルステストで試験した結果も陰性であり、本研究結果が試料へのLPSの混入によるものである可能性は低いものと推察される。

本研究旨在鉴定与牛奶酪蛋白胰蛋白酶消化产生的功能性肽“酪蛋白磷酸肽（CPP）”的免疫增强作用相关的受体，并获得以下发现。首先，为了阐明小鼠脾细胞培养系统中直接作用于 CPP 的亚群，我们使用磁性细胞分离系统 (MACS) 来分离 CD4^+、CD8^+ 和 CDI9^+ 细胞群。 CPP 对各组的影响。结果，观察到对细胞增殖反应和细胞因子表达（IL-6等）有显着的促进作用，特别是在CD19^+细胞群中，推测这些作用在IgA中发挥着重要作用。 CPP的促进作用已经实现。因此，我们将重点放在Toll样受体（TLR）（具有类似作用的B细胞有丝分裂原受体）上，并研究了在抑制TLR2、TLR4和TLR9信号转导的抗体存在下CPP的作用。研究表明，抗 TLR4 抗体存在时，细胞增殖反应和细胞因子表达均受到抑制。 TLR4 参与 CPP 活性的事实还表明，在源自 C3H/HeJ 小鼠脾脏的 B 细胞培养系统中没有观察到 CPP 效应，这些小鼠的 TLR4 存在基因点突变，且信号转导存在缺陷。。 TLR4被认为是脂多糖（LPS）的受体，脂多糖是革兰氏阴性菌的一种成分，有人指出，过去由于样本中的LPS污染而出现了许多错误报道。因此，我们进一步证实了CPP在LPS活性抑制剂多粘菌素B存在下的作用，并发现没有观察到对活性的影响。此外，用LPS检测试剂鲎试剂对本实验所用样品进行检测，结果也呈阴性，推测本研究结果是由于样品受到LPS污染的可能性较低。