イモリ精原細胞の減数分裂開始機構の解明

阐明蝾螈精原细胞减数分裂起始机制

• 批准号: 04J08613
• 负责人: 安部 恵祐
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J08613/
• 关键词: 精子形成; イモリ精原細胞; EGF; ErbB inhibitor; PD98059; LY294002; 減数分裂

Epidermal Growth Factor(EGF)は精原細胞の分化や増殖を制御し、セルトリ細胞で発現していることが知られている。EGFファミリーはそれぞれErbBファミリ-(ErbB1〜4)と結合する。ErbBは2量体を形成し、様々な組み合わせのヘテロダイマーやホモダイマーを形成し、必要に応じたシグナル伝達経路にシグナルを伝える。EGFはEGF receptor(ErbB1)に結合し、Raf/MAPKもしくはPI3Kの経路へとシグナルを伝達する。そこで、私はイモリ精巣器官培養を用いて、イモリ精原細胞へ対するhuman recombinant EGF(hEGF)の働きについて調べた。その結果、hEGFが濃度依存的(200ng〜4μg/ml)に精原細胞を増殖することがわかった。しかし、2週間の精原細胞の長期培養を行ったところ、porcine FSHでは精母細胞へ分化するのに対し、hEGFでは分化しなかった。また、ErbBの働きを調べるために、ErbB阻害剤を用いて実験を行った。PD153035(ErbB tyrosine kinase inhibitor)・AG879(ErbB2 inhibitor)・AG1478(EGFR inhibitor)を用いた。hEGFとpFSHによって増殖活性を上げた精原細胞へ対して各阻害剤を培地へと添加した。その結果、各阻害剤は阻害作用を示した。精原細胞の増殖ではErbBファミリーが働いていることが示唆された。また、同様にMAPKとPI3kシグナル伝達経路を調べるためにPD98059やLY294002を用いた。hEGFとpFSHによって増殖活性を上げた精原細胞へ対して各阻害剤を培地へと添加した。その結果、両シグナルとも精原細胞の増殖にかかわっていることがわかった。他に,ErbBの発現や一部クローニングも行った。

表皮生长因子 (EGF) 已知可控制精原细胞的分化和增殖，并在支持细胞中表达。每个 EGF 家族均与 ErbB 家族 (ErbB1-4) 结合。 ErbB形成二聚体，形成异二聚体和同二聚体的各种组合，并将信号传递至适当的信号传导途径。 EGF 与 EGF 受体 (ErbB1) 结合并向 Raf/MAPK 或 PI3K 通路传递信号。因此，我利用蝾螈睾丸器官培养物研究了人重组EGF（hEGF）对蝾螈精原细胞的影响。结果表明，hEGF 以浓度依赖性方式（200 ng 至 4 μg/ml）增殖精原细胞。然而，当精原细胞长时间培养两周时，它们在猪FSH的作用下分化为精母细胞，但在hEGF的作用下则不能分化为精母细胞。此外，为了研究 ErbB 的功能，我们使用 ErbB 抑制剂进行了实验。使用PD153035（ErbB酪氨酸激酶抑制剂）、AG879（ErbB2抑制剂）和AG1478（EGFR抑制剂）。将各抑制剂添加至精原细胞的培养基中，其增殖活性因hEGF和pFSH而增加。结果，各抑制剂均显示出抑制效果。有人认为 ErbB 家族在精原细胞的增殖中发挥作用。同样，PD98059 和 LY294002 用于研究 MAPK 和 PI3k 信号通路。将每种抑制剂添加到精原细胞的培养基中，其增殖活性因hEGF和pFSH而增加。结果表明，这两种信号均参与精原细胞的增殖。我们还表达并部分克隆了 ErbB。