細胞内輸送システムによるイノシトールリン脂質シグナル伝達経路の空間的制御機構

细胞内转运系统对肌醇磷脂信号通路的空间控制机制

• 批准号: 11J10625
• 负责人: 李 翠芳
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J10625/
• 关键词: イノシトールリン脂質; PI4P5キナーゼ; 細胞増殖抑制; 細胞内輸送システム; 脂質結合タンパク質; 分裂酵母モデル生物; 蛋白質・脂質オーバーレイアッセイ

本研究は、独自の研究成果に立脚した独創的な分子遺伝学的手法とゲノムワイドな手法を用いて、1)生体に必須の役割を持つ脂質の一つであるイノシトールリン脂質 : PI4,5P2を介するシグナル伝達経路の制御因子の同定を行い、2)イノシトールリン脂質の空間的ダイナミクスの制御機構を細胞内輸送システムに焦点をあてて明らかにすることで、3)イノシトールリン脂質シグナルネットワークの解明をめざすものである。本年度は以下のことを明らかにした。まずPI4P5KであるIts3の過剰発現による異常な膜構造の構成成分を調べる目的で、Calcofluorを用いてIts3過剰発現細胞を染めると、異常な膜構造の中に細胞壁成分が存在することを明らかにした。またIts3過剰発現はGolgi体の肥厚と液胞の断片化を引き起こしたことから、異常な膜構造の形成は細胞内小器官や細胞内輸送に障害をもたらすことが考えられる。最後に、細胞内輸送に関わるRabの機能低下は、過剰発現レベルとendogenousレベルのIts3局在、またその産物であるPI4,5P2の分布に影響を与える。さらにRabの機能低下細胞において、PI4,5P2の量が顕著に低下したことを明らかにした(Li et al.,Genes Cells, 2014)。またIts3過剰発現に伴う細胞増殖抑制を回復する因子として同定されたSlp2に関して、昨年度lipid/protein overlay assayを用いて、Slp2の結合脂質を同定したが、本年度liposome assayを駆使して、Slp2の脂質結合相手を探っている。さらに、京都大学と共同研究を行い、Slp2過剰発現細胞とノックアウト細胞における脂質プロファイリングを測定した。その結果、Slp2は脂質の代謝に重要な役割を果たしていることが明らかになった。

这项研究旨在根据原始研究结果阐明巧妙的分子遗传和全基因组方法：1）通过PI4,5P2识别调节信号的因素，PI4,5P2是在生物体中具有重要作用的脂质之一； 2）阐明控制肌醇磷脂的空间动力学的机制，重点是细胞内运输系统； 3）阐明肌醇磷脂信号网络。今年，以下揭示了：首先，要研究由于ITS3，PI4P5K的过表达而引起的异常膜结构的成分，当它用钙氟染色时，揭示了细胞壁成分在异常膜结构中存在。此外，IT 3过表达导致高尔基体的增厚和液泡的破碎，因此人们认为异常膜结构的形成会导致细胞内细胞器和细胞内转运的损害。最后，RAB的功能涉及细胞内转运的功能会影响其3定位的过表达和内源水平，以及其产品的分布PI4,5P2。此外，揭示了RAB缺陷细胞中PI4和5P2的量显着降低（Li等，Genes Cells，2014）。此外，关于SLP2，该因子被确定为恢复与ITS3过表达相关的细胞增殖抑制的因素，我们使用脂质/蛋白质覆盖分析鉴定了SLP2结合脂质，去年，今年我们正在使用Liposomes Assay找到SLP2的脂质结合伙伴。此外，与京都大学进行了一项联合研究，以测量过表达SLP2的细胞和基因敲除细胞中的脂质分析。结果表明，SLP2在脂质代谢中起重要作用。

项目成果

細胞内輸送シスアムによるイノシトールリン脂質シグナル伝達経路の空間的制御機構

细胞内转运系统对肌醇磷脂信号通路的空间控制机制

• 发表时间: 2011
• 作者: Cuifang Li;Ayako Kita;Yuuka Hashimoto;Misako Ihara;Ayaka Kato;Naoya Ogura;Reiko Sugiura;李翠芳;喜多綾子;李翠芳
• 通讯作者: 李翠芳

The regulatory mechanism of phospholipid balance by lipid binding protein

脂质结合蛋白调节磷脂平衡的机制

• 发表时间: 2013
• 作者: Cuifang Li;Ayako Kita;Yuuka Hashimoto;Misako Ihara;Ayaka Kato;Naoya Ogura;Reiko Sugiura
• 通讯作者: Reiko Sugiura

細胞内輸送とイノシトールリン脂質シグナル伝達経路の機能的関係

细胞内转运与肌醇磷脂信号通路之间的功能关系

• 发表时间: 2012
• 作者: 李翠芳;喜多綾子;橋本佑香;井原美沙子;加藤彩香;石渡俊二;杉浦麗子
• 通讯作者: 杉浦麗子

AP-1アクセサリータンパク質sip1と低分子量Gタンパク質Rho3によるメンブレントラッフィック制御機構の解明

AP-1辅助蛋白sip1和低分子量G蛋白Rho3对膜运输控制机制的阐明

• 发表时间: 2013
• 作者: 片山雄大;于陽;李翠芳;窪内康二;久能樹;新谷真未;喜多綾子;杉浦麗子
• 通讯作者: 杉浦麗子

Spatial regulatory mechanism of the PI4,5P2 signaling pathway by membrane trafficking system

膜运输系统对PI4,5P2信号通路的空间调控机制

• 发表时间: 2011
• 作者: Keiko Uen-oShuto;Tsuyoshi Shuto;Miki Sato;Keizo Sato;Mary Ann Suico;Yuji Uchida;Naofumi Tokutomi;and Hirofumi Kai Lipopolysaccharide decreases;Reiko Sugiura;首藤恵子;Ryosuke Satoh;首藤恵子;Reiko Sugiura;首藤恵子;Mitsuhiro Domae;Cuifang Li
• 通讯作者: Cuifang Li