先天性QT延長症候群の疾患特異的iPS細胞の樹立および実験系の構築

先天性长QT综合征疾病特异性iPS细胞及实验体系的建立

基本信息

批准号：
22790725
负责人：
関倫久
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790725/
关键词：
先天性QT延長症候群 iPS細胞心筋分化センダイウイルス

项目摘要

我々はiPS細胞を臨床応用する際の障壁として、皮膚生検組織から作成するという点、樹立に数カ月を要するという点、腫瘍形成の危険があるという点が問題となっていることに注目した。特に皮膚生検では患者の体に跡が残るため、特に女性や幼児から作成する際に大きな障害となっていた。これらの問題を解決するべく、患者にとってより低侵襲に、短期間に、より安全なiPS細胞を樹立する方法を開発し、移植ソース、病態再現ツールとして臨床に適用可能なiPS細胞樹立法を確立することを目的とし研究を開始した。我々は臨床応用を見据えたiPS細胞の樹立へ向けて、採取細胞の検討を行った。外来で容易に採取可能で、患者の負担が最小限である組織採取法を検討した結果、我々は末梢血T細胞に注目した。末梢血T細胞は採血で採取が簡便に可能であり、患者の体に傷はほぼまったく残らない。さらに末梢血T細胞は抗CD3抗体、インターロイキン2(IL2)の存在下で容易に増殖させることが可能である。そこで我々はセンダイウイルスがヒト活性化末梢血T細胞に高効率で感染することに注目し、センダイウイルスを用いて4つの転写因子(Oct3/4,Sox2,Klf4,c-Myc)を導入し、末梢血T細胞からiPS細胞を樹立することに成功した。既に我々は、ヒトiPS細胞からの浮遊培養を用いた心筋誘導、および薬剤反応の評価の実験系の構築に成功している。今後、健常成人、先天性心臓イオンチャネル疾患の患者からiPS細胞を樹立し、心筋へ分化誘導し解析する。iPS細胞の樹立のための細胞採取を採血で行し、既に同樹立法により正常例4例、先天性QT延長症候群3例(LQT22例、LQT71例)からの樹立が終了しており、今後対象症例を増やしていく。

我们注意到，IPS细胞临床应用的障碍包括它们是由皮肤活检组织制成的事实，即建立它们需要几个月的事实以及肿瘤发生的风险。皮肤活检尤其在患者的身体上留下了痕迹，这是妇女和幼儿造成的主要障碍。为了解决这些问题，我们已经开始研究，目的是开发一种方法来建立较短时间内患者的IPS细胞，并建立临床上适用的IPS细胞建立作为移植源，并且是一种重现病理学的工具。我们研究了收集的细胞，以准备建立IPS细胞，重点是临床应用。在检查了在门诊诊所中很容易收集的组织收集方法，并且对患者的负担很小，我们专注于外周血T细胞。外周血T细胞很容易通过收集血液收集，并且几乎没有伤口留在患者的身体上。此外，在存在抗CD3抗体的介菌2（IL2）的情况下，外周血T细胞很容易生长。因此，我们专注于感染人类活化的外周血T细胞的仙台病毒的高效率，并通过引入四个转录因子（OCT3/4，SOX2，KLF4，C-MYC），通过使用仙台病毒成功地从外周血T细胞中建立了IPS细胞。我们已经成功地构建了使用人IPS细胞的悬浮培养物来构建用于心肌诱导和评估药物反应的实验系统。将来，IPS细胞将由健康的成年人和先天性心脏离子通道疾病的患者建立，诱导分化为心肌并进行分析。进行细胞收集以通过血液收集来建立IPS细胞，并且在4例正常病例和3例先天长QT综合征（22例LQT和71例LQT病例）中已经建立了细胞的建立，未来将增加合格病例的数量。