C型肝炎ウイルスコア蛋白質による細胞内の酸化ストレスの上昇

丙型肝炎病毒核心蛋白引起的细胞内氧化应激增加

基本信息

批准号：
14770254
负责人：
金森崇
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770254/
关键词：
C型肝炎コアタンパク質ミトコンドリア酸化ストレス

项目摘要

ヒト肝ガン細胞HepG2にC型肝炎ウイルスのコアタンパク質を恒常的に発現させた細胞株とコントロール株を作製し,酸化ストレスに対する耐性度,およびミトコンドリアの機能の比較を行なった。初めに,未処理の時の細胞内の活性酸素量を,コアタンパク質発現細胞,及びコントロール細胞を細胞内の活性酸素と反応する蛍光色素(CM-H_2DCFDA)を用いて染色後,フローサイトメーターを用いて定量したが,コア発現細胞とコントロール細胞間で差は認められなかった。この結果は,コアタンパク質を発現しただけでは,細胞の活性酸素量は上昇しないことを示している。また,酸化ストレスを与える薬剤(過酸化水素,メナジオン,アンチマイシンA(呼吸鎖複合体IIIの阻害剤))を培地に添加して,細胞の生存率を比較した。コントロール細胞と比較して,コアタンパク質発現細胞で生存率に変化はなかった。次に,コアタンパク質がミトコンドリアの活性に影響を与えているかを調べた。酸素電極を用いて細胞全体の酸素消費速度を測定したが,差は見られなかった。また,Mitotracker Redで細胞を染色してミトコンドリア内膜の膜電位を測定したが,差は見られなかった。すなわち,発現したコアタンパク質はミトコンドリアの呼吸鎖酵素,膜電位には影響していないことが分かった。コアタンパク質は細胞内のERで切断されて成熟体となるので,DTT,tunicamycinのようなERストレスを与える薬剤についてもその耐性度を検討した。その結果,DTT処理において,コアタンパク質発現細胞で生存率が低下していた。細胞内のグルタチオン濃度を測定したが,差は見られなかった。また,DTT処理後のグルタチオン濃度も差が見らなかった。これらのことから,コアタンパク質発現細胞では,DTT特異的なERストレスに脆弱になっている可能性が示唆された。

我们创建了在人肝癌细胞 HepG2 和对照菌株中组成型表达丙型肝炎病毒核心蛋白的细胞系，并比较了它们对氧化应激的抵抗力和线粒体功能。首先，使用与细胞内活性氧反应的荧光染料（CM-H_2DCFDA）对表达核心蛋白的细胞和对照细胞进行染色后，使用流式细胞仪测量未处理细胞中的细胞内活性氧的量。表达细胞和对照细胞。该结果表明细胞内活性氧的量并不仅仅通过表达核心蛋白而增加。我们还在培养基中添加了引起氧化应激的药物（过氧化氢、甲萘醌、抗霉素 A（呼吸链复合物 III 抑制剂））并比较了细胞存活率。与对照细胞相比，核心蛋白表达细胞的存活率没有变化。接下来，我们研究了核心蛋白是否影响线粒体活性。我们用氧电极测量了整个细胞的耗氧率，但没有发现差异。我们还用 Mitotracker Red 对细胞进行染色并测量线粒体内膜的膜电位，但没有观察到差异。换句话说，发现表达的核心蛋白并不影响线粒体呼吸链酶或膜电位。由于核心蛋白被细胞内 ER 裂解并成为成熟形式，我们还研究了其对引起 ER 应激的药物（如 DTT 和衣霉素）的耐药性。结果表明，DTT处理后核心蛋白表达细胞的存活率降低。测量细胞内谷胱甘肽浓度，未发现差异。此外，DTT 处理后谷胱甘肽浓度没有观察到差异。这些结果表明表达核心蛋白的细胞可能容易受到 DTT 特异性 ER 应激的影响。