C型肝炎ウイルスコア蛋白質の細胞内局在と宿主細胞の応答メカニズム

丙型肝炎病毒核心蛋白的亚细胞定位及宿主细胞反应机制

基本信息

批准号：
15790244
负责人：
鈴木亮介
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

肝炎や肝硬変、肝癌の原因ウイルスであるC型肝炎ウイルス(HCV)のコア蛋白質はER、ミトコンドリア、脂肪滴、核など複数の細胞内小器官に局在し、遺伝子の転写調節、免疫系、脂質代謝、アポトーシスに対する感受性など様々な影響を有する多機能な蛋白質として知られているが、それらの分子レベルでのメカニズムは未だ明らかでない。そこで細胞内の各小器官におけるコア蛋白質の機能を分子レベルで明らかにする為に、初めにコア蛋白質の細胞内局在を規定するシグナルの解析を行なった。コア蛋白質の様々な領域とGFPとの融合蛋白質を発現させ、分画および細胞染色により、コア蛋白質のアミノ酸112-152番目の領域がERおよびミトコンドリアへの局在に重要である事を明らかにした。またコア蛋白質のN末端側の3カ所の塩基性アミノ酸クラスターがimportinαとの結合に重要である事から、これらの領域がコア蛋白質の核移行シグナルとして機能すると考えられた。次に核内におけるコア蛋白質の機能を明らかにするために、核に局在するコア蛋白質の変異体を発現させ、核を分画し、プロテオーム解析を行なった。その結果、陰性対照群と比較して等電点が変化する分子量が約12kDaおよび36kDaの2つのスポットを見いだした。MALDI-TOF-MSによる分析より、12kDaのスポットがEnhancer of Rudimentary Homologue、36kDaのスポットがTGF-beta receptor interacting protein 1である事を明らかにした。しかしながらこれらの蛋白質は、HCVコア蛋白質との直接的な結合は認められず、またコア蛋白質によるリン酸化レベルの変化も認められなかった。この事からリン酸化以外の修飾が生じている可能性が示唆された。

丙型肝炎病毒（HCV）是一种引起肝炎、肝硬化和肝癌的病毒，其核心蛋白定位于内质网、线粒体、脂滴和细胞核等多种细胞内细胞器，参与基因转录调控。尽管已知它是一种多功能蛋白质，对代谢和细胞凋亡易感性具有多种影响，但分子水平的机制仍不清楚。因此，为了在分子水平上阐明细胞内每个细胞器中核心蛋白的功能，我们首先分析了定义核心蛋白细胞内定位的信号。我们在核心蛋白的各个区域和 GFP 之间表达了融合蛋白，并通过分级分离和细胞染色揭示了核心蛋白的氨基酸 112-152 区域对于定位到 ER 和线粒体非常重要。此外，由于核心蛋白 N 端侧的三个碱性氨基酸簇对于与 importinα 的结合很重要，因此这些区域被认为充当核心蛋白的核输出信号。接下来，为了阐明核内核心蛋白的功能，我们表达了位于核内的核心蛋白突变体，分级分离了核，并进行了蛋白质组分析。结果，发现分子量约为12kDa和36kDa的两个点，其等电点与阴性对照组相比发生了变化。 MALDI-TOF-MS分析表明，12kDa点是基本同源物的增强子，36kDa点是TGF-β受体相互作用蛋白1。然而，没有观察到这些蛋白与HCV核心蛋白的直接结合，也没有观察到核心蛋白引起的磷酸化水平的任何变化。这表明可能发生磷酸化以外的修饰。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Sacco R., Tsutsumi I., Suzuki R., Otsuka M., Aizaki H., Sakamoto S., Matsuda M., Seki N., Matsuura Y., Miyamura T., Suzuki T.: "Antiapoptotic regulation by hepatitis C virus core protein through up-regulation of inhibitor of caspase-activated DNase."Virol

Sacco R.、Ttsutsumi I.、Suzuki R.、Otsuka M.、Aizaki H.、Sakamoto S.、Matsuda M.、Seki N.、Matsuura Y.、Miyamura T.、Suzuki T.：“丙型肝炎的抗凋亡调节

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Molecular Determinants for Subcellular Localization of Hepatitis C Virus Core Protein

DOI：
10.1128/jvi.79.2.1271-1281.2005
发表时间：
2005-01-15
期刊：
Journal of Virology
影响因子：
5.4
作者：
R. Suzuki;S. Sakamoto;T. Tsutsumi;Akiko Rikimaru;Keiko Tanaka;T. Shimoike;K. Moriishi;T. Iwasaki
通讯作者：
T. Iwasaki

Antiapoptotic regulation by hepatitis C virus core protein through up-regulation of inhibitor of caspase-activated DNase.

丙型肝炎病毒核心蛋白通过上调 caspase 激活的 DNase 抑制剂进行抗凋亡调节。

DOI：
10.1016/j.virol.2003.08.028
发表时间：
2003-12-05
期刊：
Virology
影响因子：
3.7
作者：
R. Sacco;T. Tsutsumi;R. Suzuki;M. Otsuka;H. Aizaki;S. Sakamoto;Mami Matsuda;N. Seki;Y. Matsuura;T. Miyamura;Tetsuro Suzuki
通讯作者：
Tetsuro Suzuki