嗅上皮における薬物代謝第三相(多剤耐性関連タンパク)による異物排出機構

嗅上皮中药物代谢第三阶段（多药耐药相关蛋白）的异物排泄机制

基本信息

批准号：
14770012
负责人：
工藤秀明
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の研究実施計画に沿って、Wistar系正常雄性アルビノラット嗅上皮での発現が確認された多剤耐性関連タンパク(multidrug resistace-related proten ; MRP)のアイソフォームの1つであるMRP1に着目し解析を継続した。前年度までの解析により、MRP1遺伝子およびタンパクは、嗅上皮の支持細胞と嗅細胞の一部と推察される細胞に発現が認められたことから、より明確に嗅細胞の同定を可能にするために成熟嗅細胞の指標分子であるolfactory marker protein (OMP)に対する特異抗体を作製した。他の脊椎動物のOMPにおいてもアミノ酸配列が保存されている領域を含む20残基の合成ペプチドを抗原として家兎に免疫し抗血清を得た。得られた抗血清は、同ペプチドによるアフィニティー精製の後、抗OMPポリクローナル抗体として用いた。今回作製した抗OMPポリクローナル抗体とこれまで用いてきた抗MRP1モノクローナル抗体による蛍光二重標識免疫組織化学的解析を正常ラット嗅上皮で施行したところ、MRP1は主として支持細胞にその局在が認められ、一部のOMPで標識される成熟嗅細胞にも共局在が見られることが明らかとなった。このことより、これまで我々が注目してきた支持細胞における薬物代謝の第III相のみならず、受容細胞自身においても異物排出ポンプとして機能している可能性が示された。次に、化学物質曝露がMRP1発現に与える影響を解析するため、内視鏡などの消毒時に医療従事者の職業性曝露が近年問題視されているグルタールアルデヒドの吸入曝露ラット実験モデルを作製した。現在、曝露実験を継続中であり、MRP1の遺伝子およびタンパク質の曝露にともなう発現変化の有無を検索中である。並行して、MRP1プロモーターとクラゲ緑色発光タンパクとの融合遺伝子の嗅上皮への遺伝子導入の条件設定を調整中である。

符合本研究的研究实施计划，我们重点对多药耐药相关蛋白（MRP）的亚型之一MRP1进行了分析，该蛋白已被证实在正常雄性Wistar白化大鼠的嗅觉上皮中表达。持续。截至前一年进行的分析显示，MRP1 基因和蛋白质在嗅觉上皮的支持细胞和被认为是嗅觉细胞一部分的细胞中表达。我们产生了针对嗅觉标记蛋白 (OMP) 的特异性抗体。成熟嗅觉细胞的指示分子。用含有 20 个残基的合成肽对兔子进行免疫接种获得抗血清，该合成肽含有一个氨基酸序列在其他脊椎动物 OMP 中保守的区域。使用相同的肽进行亲和纯化后，将获得的抗血清用作抗OMP多克隆抗体。使用我们这次创建的抗OMP多克隆抗体和迄今为止使用的抗MRP1单克隆抗体对正常大鼠嗅觉上皮进行荧光双标记免疫组织化学分析，发现MRP1主要定位于支持细胞。研究表明，在用一些 OMP 标记的成熟嗅觉细胞中也观察到共定位。这表明它不仅可能在支持细胞的药物代谢第三阶段发挥作用（目前我们一直关注这一点），而且还可能在受体细胞本身中作为异物流出泵发挥作用。接下来，为了分析化学品暴露对MRP1表达的影响，我们创建了吸入戊二醛的实验大鼠模型，戊二醛最近已成为医护人员在内窥镜消毒等过程中职业暴露的问题。目前正在进行暴露实验，我们正在寻找由于暴露而导致的 MRP1 基因和蛋白质表达的变化。与此同时，我们正在调整将 MRP1 启动子和水母绿色发光蛋白之间的融合基因引入嗅上皮的条件。