ブレオマイシン肺線維症のトリガー新規TGF-β遺伝子の働き

博来霉素触发肺纤维化的新型TGF-β基因的功能

基本信息

批准号：
14771283
负责人：
熊谷孝則
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

ブレオマイシン(BLM)は、精巣癌などの治療に用いられる優れた抗癌剤であるが、副作用として重篤な肺線維症を引き起こすため、その使用には常に制限が伴う。これまで、ヒト肺正常線維芽細胞(WI-38)にBLMを投与した際に引き起こされる遺伝子発現の変化を、Differential Display(DD)法により調査した結果、transforming growth factor β(TGF-β)のsuperfamilyに属すると考えられる遺伝子の発現が昂進することを発見した。RT-PCRにより、BLM投与後、約3時間後から本遺伝子の発現が昂進することを明らかにしている。本研究では、本遺伝子とBLM肺線維症の関係を明らかにすることを目的とした。DD法により得られた遺伝子は、その3'末端の一部の配列であったため、まず、全長型遺伝子を5'-RACE法によりクローニングすることを試みた。3'末端配列の情報に基づき、遺伝子特異的プライマー(GSP)を数種類作成後、Smart RACE cDNA Amplification Kit (Clontech)を用いて5'-RACEを行った結果、全長型遺伝子と考えられる断片を得ることができた。シークエンシングの結果、得られた遺伝子の3'末端配列は、TGF-β superfamily遺伝子と相同性を示したが、その5'側の配列はDatabase上の遺伝子と明確な相同性を示さなかった。現在、得られた全長型遺伝子を発現ベクターpcDNA 3.1(Invitrogen)に導入し、本遺伝子の過剰発現が線維芽細胞に及ぼす影響を調査している。また、得られた全長型遺伝子が目的の遺伝子でない場合も考慮し、5'-RACEによるクローニングも並行して行っている。

博莱霉素（BLM）是一种用于治疗睾丸癌的优秀抗癌药物，但其使用始终受到限制，因为它的副作用会导致严重的肺纤维化。此前，我们使用差异显示（DD）方法研究了BLM对人肺正常成纤维细胞（WI-38）施用引起的基因表达变化，发现转化生长因子β（TGF-β）基因的表达发生了变化。属于超家族的想法得到了增强。 RT-PCR 显示该基因的表达在 BLM 给药后约 3 小时增加。本研究的目的是阐明该基因与BLM肺纤维化之间的关系。由于DD法获得的基因是其3'端的部分序列，我们首先尝试通过5'-RACE法克隆全长基因。根据3'末端序列的信息制作多种基因特异性引物（GSP）后，使用Smart RACE cDNA Amplification Kit（Clontech）进行5'-RACE，结果获得了如下片段：被认为是我能够做到这一点的全长基因。测序结果显示，获得的基因的3'端序列与TGF-β超家族基因显示出同源性，但5'端序列与数据库上的基因没有显示出明显的同源性。我们目前正在将获得的全长基因导入表达载体pcDNA 3.1（Invitrogen）中，并研究该基因的过表达对成纤维细胞的影响。另外，考虑到获得的全长基因不是所需基因的情况，还并行进行通过5'-RACE的克隆。