細胞接着能を標的としたEVI1高発現白血病治療法の開発

开发高EVI1表达靶向细胞粘附能力的白血病治疗方法

基本信息

批准号：
21659241
负责人：
森下和広
金额：
$ 1.98万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ITGB4/ITGA6による細胞接着と抗がん剤耐性性の検討EVI1高発現白血病細胞に対してshITGB4、shITGA6,shITGB1を導入し、matrigel及びMC3T3-E1細胞に対する細胞接着能低下はshITGB4及びshITGA6のみ見られた。またそれぞれの中和抗体を用いた実験により、ITGB4及びITGA6が特異的に細胞接着能を落とした。EVI1低発現白血病細胞にEVI1遺伝子導入すると、EVI1遺伝子発現依存的にITGA6及びITGB4遺伝子発現及び細胞接着能の亢進が見られた。抗がん剤耐性性はAraC及びVP16に対して、EVI1及びITGB4/ITGA6発現、及び細胞接着に依存した耐性性を示した。2.ITGB4/ITGA6に対する遺伝子発現解析ITGB4/ITGA6発現陽性細胞株ではMatrigelやLaminin接着によりPI3K/Akt経路が活性化された。また同時に抗アポトーシス作用を有するBCL2が活性化され、抗がん剤耐性性に関わる事が分かった。3.ITGB4/ITGA6接着阻害効果のある抗体・新規低分子化合物の探索並びにin vivo試験ITGB4に対する中和抗体が接着阻害効果を示すことが明らかになったため、抗体研究所と共同で、phage display法によりヒトITGB4/ITGA6抗体を開発した。ITGA6/B4複合体(5種)、ITGA6(3種)に対する抗体をスクリーニングした結果、EVI1高発現白血病細胞株への細胞障害性、及び抗がん剤への感受性の増大を示す抗体が確認された。現在健常人末梢血を用いたADCC、CDCアッセイを行ない、更なる治療抗体の絞り込みを目指している。

1。对ITGB4/ITGA6的细胞粘附和抗癌药物耐药性的检查被引入EVI1高表达的白血病细胞，只有ShitGB4和Shitga6显示出矩阵和MC3T3-E1细胞的细胞粘附能力降低。此外，通过使用中和抗体的实验，ITGB4和ITGA6特异性降低了细胞粘附能力。将EVI1基因转导向EVI1低表达白血病细胞显示出以依赖方式的ITGA6和ITGB4基因和细胞粘附能力的表达增加。抗癌耐药性显示对ARAC和VP16的抗性，这取决于EVI1和ITGB4/ITGA6表达以及细胞粘附。 2。iTGB4/ITGA6在表达阳性细胞系中的ITGB4/ITGA6的基因表达分析，PI3K/AKT途径被Matrigel和层粘连蛋白粘附激活。还发现具有抗凋亡特性的BCL2同时被激活，并参与抗癌药物耐药性。 3。在寻找具有抑制粘附作用和新型小分子化合物的抗体和体内测试的抗体，发现针对ITGB4的中和抗体表现出粘附抑制作用，因此我们与抗体研究所合作，我们开发了使用Phage显示方法的人ITGB4/ITGA6抗体。筛选针对ITGA6/B4复合物（5种）和ITGA6（3种）的抗体证实了抗体，这些抗体表现出对EVI1高表达白血病细胞系的细胞毒性，并增加对抗癌剂的敏感性。目前，我们正在使用健康个体的外周血进行ADCC和CDC分析，并旨在缩小进一步的治疗抗体。