新発想RT-DDSによるアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発

利用新概念RT-DDS开发过敏性和免疫性疾病的基因治疗方法

基本信息

批准号：
10J10483
负责人：
小出裕之
金额：
$ 0.9万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10483/
关键词：
リポソーム Drug delivery system siRNA RT-DDS スギ花粉症 Cri j 1 ポリチオンリボソーム durg delivery system Reverse Targeting DDS

项目摘要

私は、Reverse Targeting DDS(RT-DDS)を用いたアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発を目的として研究を行ってきた。本研究では、RT-DDS技術によるsiRNAのデリバリーのために、モデル抗原として卵白アルブミン(ovalbumin ; OVA)を用い、製剤開発のための基礎検討、さらに、アレルギー疾患への応用に向け、スギ花粉(Cry j1)を用いたRT-DDS技術の確立を目指して行った。siRNAデリバリーベクターは、ポリカチオン脂質であるdicetyl phosphate-tetraethylenepentamine(DCP-TEPA)を基盤としたポリカチオンリポソーム(PCL)を用いることで、リポソームをプラスに帯電させ、マイナス電荷のsiRNAを修飾する方法を選択した。脂質誘導体PEG-maleimideをリンカー分子とし、OVAをリポソーム外膜に修飾することに成功した。また本ベクターはin vitroにおいてOVA抗体と特異的な結合能を示し、選択的siRNA送達キャリアとしての可能性が示された。また、その有用性はOVA感作マウスにおける脾臓の組織学的解析からも示唆された。続いて、siRNAを用いた遺伝子治療法の確立に先立ち、一般的なリポソーム組成であるDPPC/Cho=2:1のリポソームにCry j 1を修飾し、治療方法の確立を目指した。本研究ではこれまでに、スギ花粉からCry j 1を効率良く抽出・精製する方法を確立し、Cry j 1修飾リポソームがCry j 1特異的lgG1抗体と特異的かつ高い結合性を示すことが明らかにしてきた。今年度は、スギ花粉症モデルマウスを用いたin vivo実験を行った。脾臓内における詳細な局在を検討したところ、Cry j 1修飾リポソームは脾臓内に存在するB細胞集団と共局在していたのに対し、未修飾のリポソームはその周囲にのみ存在していることが確認された。さらに興味深いことに、Cry j 1修飾リポソームはB細胞集団のうち、分化成熟の場として知られる胚中心に多く集積することが明らかとなった。以上の結果より、Cry j 1修飾リポソームはCry j 1特異的免疫細胞群への標的性を有することが示唆され、スギ花粉症根治療法確立への可能性が示された。

我一直在进行研究，目的是利用反向靶向 DDS (RT-DDS) 开发过敏性和免疫性疾病的基因治疗方法。在本研究中，我们使用卵清蛋白（OVA）作为使用 RT-DDS 技术进行 siRNA 递送的模型抗原，并进行了药物开发的基础研究。我们的目标是使用 Cry j1) 建立 RT-DDS 技术。 siRNA递送载体使用基于聚阳离子脂质二十六烷基磷酸四乙烯五胺(DCP-TEPA)的聚阳离子脂质体(PCL)，使脂质体带正电荷并修饰带负电荷的siRNA。我们使用脂质衍生物PEG-马来酰亚胺作为连接分子，成功地将OVA修饰到脂质体外膜上。此外，该载体在体外表现出与OVA抗体的特异性结合能力，表明其作为选择性siRNA递送载体的潜力。 OVA 致敏小鼠脾脏的组织学分析也表明了其有用性。接下来，在建立使用siRNA的基因治疗方法之前，我们将Cry j 1修饰成具有DPPC/Cho=2:1的常见脂质体组成的脂质体，旨在建立治疗方法。在本研究中，我们迄今为止建立了一种从雪松花粉中有效提取和纯化 Cry j 1 的方法，并证明 Cry j 1 修饰的脂质体与 Cry j 1 特异性 IgG1 抗体表现出特异性和高结合特性。我一直在做。今年，我们使用雪松花粉病小鼠模型进行了体内实验。当我们检查脾脏内的详细定位时，我们发现 Cry j 1 修饰的脂质体与脾脏中存在的 B 细胞群共定位，而未修饰的脂质体仅存在于周围区域，这得到了证实。更有趣的是，Cry j 1修饰的脂质体在B细胞群的生发中心大量积聚，该中心被称为分化和成熟的部位。上述结果表明，Cry j 1修饰的脂质体具有针对Cry j 1特异性免疫细胞群的靶向特性，表明建立雪松花粉过敏根治治疗方法的可能性。