フグ毒トランスポーターのクローニングと機能解析

河豚毒素转运蛋白的克隆及功能分析

• 批准号: 10J07110
• 负责人: 松本 拓也
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Prefectural University of Hiroshima (2012)The University of Tokyo (2010-2011)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J07110/
• 关键词: テトロドトキシン; トランスポーター; DNAマイクロアレイ; 筋肉内投与; トラフグ; 遺伝子発現

前年度,研究代表者らは,養殖トラフグの肝臓および筋肉から作製したESTデータに対して,フグゲノムデータベースから抽出したトランスポーターをコードする推定cDNA配列を問い合わせ配列としてBLAST検索を行い,肝臓での発現が予測されるトランスポーターをコードする15遺伝子を選抜した。本年度は,RT-PCRで各組織における15遺伝子の発現分布を調べた。その結果,SLC38A5ならびにSLC25A48は卵巣と肝臓に発現が見られ,SLC23A2は肝臓,皮膚および消化管に強い発現が見られた。SLC22A16ならびにSLC16A6は肝臓および筋肉に,SLC48A1は肝臓,皮膚,卵巣および消化管に強い発現が見られ,SLC37A4は肝臓,卵巣および消化管に発現が認められ,そして,SLCO1C1は肝臓のみに発現が認められた。これら合計8遺伝子の全長cDNAをRACE法で決定し,全長cDNA配列から推定されるトラフグ肝臓トランスポーター遺伝子の演繹アミノ酸配列をヒト,ラット,ニワトリ,アフリカツメガエル,ティラピア,ゼブラフィッシュおよびミドリフグのトランスポータータンパク質と比較した。中性アミノ酸輸送体であるSLC38A5,ビタミンC輸送体であるSLC32A2,ヘム輸送体であるSLC48A1およびグルコース-6-リン酸を輸送するSLC37A4の基本的な基質を輸送する4つのトランスポーターは,様々な動物種間で高いアミノ酸同一率を示した。一方,興味深いことに,有機カチオンを輸送するSLC22Al6は魚類の間で比較的高いアミノ酸同一率を示し,有機イオンを輸送するSLCO1C1はフグ類で高いアミノ酸同一率を示した。

去年，研究代表对从养殖虎河豚的肝脏和肌肉中制备的EST数据进行了BLAST搜索，使用从河豚基因组数据库中提取的编码转运蛋白的推定cDNA序列作为查询序列，发现我们选择了15个编码转运蛋白的基因预计会被表达。今年，我们使用 RT-PCR 调查了每个组织中 15 个基因的表达分布。结果显示，SLC38A5和SLC25A48在卵巢和肝脏中表达，SLC23A2在肝脏、皮肤和胃肠道中强表达。 SLC22A16和SLC16A6在肝脏和肌肉中强表达，SLC48A1在肝脏、皮肤、卵巢和胃肠道中强表达，SLC37A4在肝脏、卵巢和胃肠道中表达，SLCO1C1仅在肝脏中表达。事情完成了。通过RACE法测定了这8个基因的全长cDNA，并根据全长cDNA序列推算出虎河豚肝脏转运蛋白基因的氨基酸序列，并从人、大鼠、鸡、爪蟾、罗非鱼、斑马鱼和绿河豚鱼相比。转运碱性底物的四种转运蛋白是SLC38A5（中性氨基酸转运蛋白）、SLC32A2（维生素C转运蛋白）、SLC48A1（血红素转运蛋白）和SLC37A4（转运葡萄糖-6-磷酸盐），显示出较高的氨基酸同一性。动物物种之间。另一方面，有趣的是，运输有机阳离子的SLC22Al6在鱼类中表现出相对较高的氨基酸同一性，而运输有机离子的SLCO1C1在河豚中表现出较高的氨基酸同一性。

项目成果

トラフグ肝臓トランスポーターslc44a1を安定発現させたHEK293細胞によるテトロドトキシンの取り込み

稳定表达虎河豚肝转运蛋白 slc44a1 的 HEK293 细胞对河鲀毒素的摄取

• 发表时间: 2011
• 作者: 松本拓也;Feroudj H;菊地遼輔;長島裕二;金子元;潮秀樹;児玉正昭;渡部終五
• 通讯作者: 渡部終五

水産学シリーズ第174号「フグ研究とトラフグ生産技術の最前線」

水产科学系列第174期《河豚鱼研究前沿及虎河豚生产技术》

• 发表时间: 2012
• 作者: Takuya Matsumoto;Daisuke Tanuma;Kazuma Tsutsumi;Shoichiro Ishizaki;Shugo Watahe;Yuji Nagashima;松本拓也
• 通讯作者: 松本拓也

Differential gene expression profile in the liver of the marine puffer fish Takifugu rubripes induced by intramuscular administration of tetrodotoxin

• DOI: 10.1016/j.toxicon.2010.12.007
• 发表时间: 2011-02-01
• 期刊: TOXICON
• 影响因子: 2.8
• 作者: Matsumoto, Takuya;Ishizaki, Shoichiro;Nagashima, Yuji
• 通讯作者: Nagashima, Yuji

Plasma protein binding of tetrodotoxin in the marine puffer fish Takifugu rubripes

• DOI: 10.1016/j.toxicon.2009.09.006
• 发表时间: 2010-02-01
• 期刊: TOXICON
• 影响因子: 2.8
• 作者: Matsumoto, Takuya;Tanuma, Daisuke;Nagashima, Yuji
• 通讯作者: Nagashima, Yuji

Tetrodotoxin Poisoning Due to Smooth-backed Blowfish <i>Lagocephalus inermis</i> and Toxicity of <i>L. inermis</i> Caught off the Kyushu Coast, Japan

光滑背河豚<i>Lagocephalus inermis</i>引起的河豚毒素中毒及<i>Lagocephalus inermis</i>的毒性。

• DOI: 10.3358/shokueishi.53.85
• 发表时间: 2012
• 期刊: Food Hygiene and Safety Science (Shokuhin Eiseigaku Zasshi)
• 作者: Masatoshi Katabuchi;Hiroko Kurokawa;Stuart J.Davies;Sylvester Tan;Tohru Nakashizuka;片渕正紀;片渕正紀;片渕正紀;片渕正紀;Yuji Nagashima
• 通讯作者: Yuji Nagashima