高分子複合抗腫瘍薬の殺細胞効果発現におけるGST-πの関与

GST-π参与高分子复合物抗肿瘤药物细胞杀伤作用表达

• 批准号: 13770678
• 负责人: 田代 健一
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770678/
• 关键词: GST-π; グルタチオン; ドキソルビシン; 高分子複合抗腫瘍薬; 抗癌剤耐性

高分子複合抗腫瘍薬の殺細胞効果発現におけるGST-πの関与についての検討を行い、本年度は以下の実験結果、成果を認めた。1)高分子複合体抗腫瘍薬の精製グルタチオン(GSH)とドキソルビシン(DXR)をグルタルアルデヒドを介して共有結合させ、高分子複合体(GSH-DXR)を生成した。さらにこれをDowex50カラムを用いて精製した。2)培養細胞の選定実験で用いる細胞は、GST-πの発現していないものとGST-πの発現しているものがそれぞれ必要とされる。予備実験の結果からGST-πの発現していないヒト肝癌細胞HepG2、発現しているヒト胃癌細胞HT29を選定し、10%ウシ胎児血清を含むDMEM及びRPMI1640で培養した。3)殺細胞効果の測定DXRおよびGSH-DXRを各細胞に96時間持続暴露し、MTT法にて生細胞数を測定した。HepG2、HT29のいずれも、DXRに比べGSH-DXRの殺細胞効果が強く認められたが、GST-πの発現していないHepG2がHT29に比べ有意に強く効果が認められた。したがってGST-πの発現が耐性に強く関与することが確認され、また単剤のDXRに比べGSH-DXRの抗腫瘍効果の増強が認められた。4)アポトーシス誘導能の検討各細胞についてDNAの断片化をアガロース電気泳動で、カスパーゼ3活性をAsp-Gt-Val-Asp-MCAを基質として測定を行い、現在検討中である。

我们研究了GST-π参与高分子复合抗肿瘤药物细胞杀伤作用表达的过程，今年，我们获得了以下实验结果和成就。 1)聚合物复合物抗肿瘤药物的纯化谷胱甘肽(GSH)和阿霉素(DXR)通过戊二醛共价结合，产生聚合物复合物(GSH-DXR)。使用Dowex50柱将其进一步纯化。 2)培养细胞的选择实验中使用的细胞需要不表达GST-π的细胞和表达GST-π的细胞。根据初步实验结果，选择不表达GST-π的人肝癌细胞HepG2和表达GST-π的人胃癌细胞HT29，在含有10%胎牛血清的DMEM和RPMI1640中培养。 3)细胞杀伤效果的测定将DXR和GSH-DXR连续暴露于各细胞96小时，通过MTT法测定活细胞数。对于HepG2和HT29来说，GSH-DXR比DXR具有更强的细胞杀伤作用，但不表达GST-π的HepG2的作用明显强于HT29。因此，证实GST-π的表达与耐药性密切相关，并且与单独的DXR相比，观察到GSH-DXR的抗肿瘤作用增强。 4)凋亡诱导能力的检查通过琼脂糖电泳测定各细胞的DNA片段化，并使用Asp-Gt-Val-Asp-MCA作为底物测定caspase 3活性，目前正在进行研究。