HDL新生メカニズムの解明:肝細胞からのpreβHDL産生機構の検討

HDL新生机制的阐明：肝细胞前βHDL产生机制的检查

• 批准号: 13770651
• 负责人: 辻田 麻紀
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770651/
• 关键词: HepG2; プロブコール; HDL新生; ABC-A1; アポリポタンパク質; マウス肝初代培養細胞; ABC-AI

HepG2細胞にプロブコール含有LDLを投与し、アポAIによる特異的な細胞脂質の搬出機構を阻害してHepG2細胞からのリポタンパク質新生反応における本経路の寄与を検討した。培養上清をTSKゲルLIPOPROPAK-XLで分離し、それをオンラインで脂質定量を行なった。コントロールLDLを投与したHepG2細胞からはLDL粒子サイズに相当するコレステロール/リン脂質のピークがと大型のHDLに相当するコレステロール/リン脂質のピークが観察された。一方プロブコール含有LDLを投与したHepG2細胞の培養上清を分析すると、LDL粒子の産生量は変化しないがHDL産生が顕著に減少していた。このことからHepG2細胞が産生するHDL粒子はプロブコールによって阻害される機構によってその大部分が産生されることが示唆される。プロブコールを投与したマクロファージ細胞ではアポAIによる細胞コレステロールの搬出のみが特異的に阻害されることは既に報告している。この結果よりプロブコールがアポAIによる細胞コレステロールの特異的な搬出機構の阻害剤であると考えられるので、ここでも同様な阻害効果が期待され、それによりHepG2細胞でのHDLの新生反応はそのほとんどがアポAIによる細胞コレステロールの搬出経路によることが示唆された。タンジール病患者の細胞はアポAIによる細胞コレステロール搬出を消失している。この原因となるタンパク質は細胞表面のABCA1タンパク質である。プロブコールがこのABCA1タンパク質に与える影響を調べる目的で細胞全体のABCA1タンパク質をウエスタンブロッティング法で測定した。その結果ABCA1タンパク質量はHDL新生の阻害されているプロブコール投与HepG2細胞でもコントロールと差が無く、プロブコールがABCA1量へは影響を与えない事が明らかになった。

我们向 HepG2 细胞施用含有普罗布考的 LDL，以抑制 apoAI 诱导的特定细胞脂质输出机制，并研究该途径对 HepG2 细胞脂蛋白形成的贡献。使用TSK凝胶LIPOPROPAK-XL分离培养物上清液，并在线进行脂质定量。从用对照LDL处理的HepG2细胞中，观察到对应于LDL粒径的胆固醇/磷脂峰和对应于大HDL的胆固醇/磷脂峰。另一方面，当分析用含有普罗布考的LDL处理的HepG2细胞的培养上清液时，LDL颗粒的产生保持不变，但HDL产生显着减少。这表明 HepG2 细胞产生的大多数 HDL 颗粒是通过普罗布考抑制的机制产生的。据报道，在用普罗布考处理的巨噬细胞中，只有apoAI的细胞胆固醇输出被特异性抑制。从这个结果来看，普罗布考被认为是apoAI细胞胆固醇特异性输出机制的抑制剂，因此这里预计会有类似的抑制作用，并且大多数HepG2细胞中的HDL新生反应被认为是由于apoAI 的细胞胆固醇输出途径。丹吉尔病患者的细胞通过 apoAI 失去细胞胆固醇输出。造成这种情况的蛋白质是细胞表面的 ABCA1 蛋白质。为了研究普罗布考对该ABCA1蛋白的影响，通过Western blotting测定了全细胞中的ABCA1蛋白。结果，对照和普罗布考处理的 HepG2 细胞之间的 ABCA1 蛋白水平没有差异，其中 HDL 生成受到抑制，并且很明显普罗布考对 ABCA1 水平没有影响。