マウス着床前胚におけるラフト機能解明

小鼠植入前胚胎筏功能的阐明

基本信息

批准号：
10J02767
负责人：
佐藤伴
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Kobe Pharmaceutical University (2011)Chiba University (2010)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ライブセルイメージングによるSSEA-4の可視化を通じ、哺乳類着床前胚におけるラフト機能解明を目指す。初年度に作製した卵特異的E-cadherinノックアウト胚を用い、E-cadherin欠損時におけるSSEA-4(monosialylGb5Cer(MSGb5Cef))の動態観察を行った。MSGb5Cerは欠損胚において割球界面への集積は認められず、割球の頭頂部に多く分布していた。このことから、MSGb5Cerの正常な分布にはE-cadherinの発現が必要と考えられた。未標識の抗体添加時に、E-cadherinの分布は、通常の割球界面での分布から割球表面での分布へと変化していた、さらにこの局在変化は抗体濃度依存的であることが判明した。また、あらかじめ蛍光標識MSGb5Cerを添加している胚では、高濃度の6E2抗体の添加によって通常とは異なり割球界面に進入できずに割球表面に集積する様子が観察された。生細胞イメージングにおいても、抗MSGb5Cer抗体と抗E-cadherin抗体の結合したシグナルが卵割時に分裂溝に伴に重なって移動していく様子が観察されていることからE-cadherinの局在や分布にMSGb5Cer豊富脂質ラフトが関与している可能性が示唆された。アクチンの重合阻害剤であるサイトカラシンDを作用させることで、MSGb5Cer豊富ラフトの分布に及ぼす影響について検討した。アクチンの重合阻害によって、割球界面への集積が減少し、割球表面に多くのシグナルが認められた。以上の結果および前年度の結果から、マウス着床前胚で、糖脂質豊富ラフトが接着分子の適所への配置を促すことによって、卵割に関与していると考えられた。これまでに、ウニなどの無脊椎動物においては卵割におけるラフトの関与が既に報告されているが、哺乳類では初めてラフトの関与を明らかにしたことは重要でありその意義は大きい。今後、接着分子E-cadherinとラフトに含まれる糖脂質やGPIアンカー型のタンパク質との相互作用を培養細胞の系などで検討することで着床前期におけるラフトの役割が明確となることが期待される。

这项研究旨在通过通过活细胞成像对SSEA-4的可视化哺乳动物植入前胚胎的筏功能。使用第一年产生的卵特异性电子 - 钙粘蛋白基因敲除胚胎，我们观察到E-钙粘着蛋白缺乏期间SSEA-4（单溶剂lgb5cer（MSGB5CEF））的动力学。没有发现MSGB5Cer在有缺陷的胚胎中积聚在胚芽结构的界面上，并且更频繁地分布在胚胎植物的顶部。这表明E-钙粘蛋白的表达是MSGB5Cer的正态分布所必需的。添加未标记的抗体后，E-钙粘着蛋白的分布已从正常浅色界面的分布变为浅层表面的分布，发现这种定位变化取决于抗体浓度。此外，在以前添加了荧光标记的MSGB5Cer的胚胎中，观察到与通常的6e2抗体添加无法进入胚芽界面并积聚在胚胎表面上，这与常规不同。在活细胞成像中，观察到抗MSGB5Cer和抗E-钙粘蛋白抗体之间的信号与卵裂期间的裂变沟重叠，这表明富含MSGBCer的脂质筏可能与E-核蛋白的定位和分布有关。研究了肌动蛋白聚合的抑制剂作用细胞切拉斯蛋白D对富含MSGBCer筏的分布的影响。抑制肌动蛋白聚合降低了胚叶界面的积累，并且在胚泡表面观察到许多信号。基于上述结果和上一年的结果，人们认为通过鼓励将粘附分子放置在适当的位置，参与小鼠植入前胚胎中的富含糖脂的筏。迄今为止，已经报道了诸如海胆之类的无脊椎动物中的筏子参与卵裂，但是重要的是，筏的参与是首次在哺乳动物中揭示的，其意义很大。将来，预计将通过检查粘附分子E-钙粘着蛋白和糖降糖蛋白与育植物蛋白中包含在培养细胞系统中的筏中的粘附分子E-钙粘着蛋白和GPI-Chand蛋白之间的相互作用来阐明筏的作用。