酵母オートファゴソーム形成機構の解明

阐明酵母自噬体形成机制

基本信息

批准号：
02J03994
负责人：
鈴木邦律
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

真核細胞が栄養飢餓環境に適応するために、自己の構成成分を分解する現象は自食作用と呼ばれる。自食作用は、オートファゴソーム(以下AP)の形成とAPの細胞内分解コンパートメントであるリソソーム/液胞との融合、それに続く分解という一連の過程を取ることが知られ、単細胞真核生物から高等動植物に至るまで広く保存されている細胞応答機構である。単細胞真核生物である出芽酵母にも自食作用が見いだされており、自食作用に必須な遺伝子群ATGの解析が進められている。これまでAtgタンパク質の局在解析は、細胞にプラスミドを持たせた系で進められてきた。新規に導入したGreen Fluorescent Protein(以下GFP)タギング法は、出芽酵母ゲノム中の標的部位に直接GFPの配列を挿入する方法で、酵母生細胞内で生理的条件下でのタンパク質の局在解析を進める上で有効な手法である。そこで本年度は、この手法を用いて可能な限りのAtgタンパク質にGFPタグを付け、それら融合タンパク質の局在を確認した。さらに、出芽酵母の利点を生かし、それぞれの株に対し網羅的にATG遺伝子の破壊を行う系を開発し、遺伝子破壊を実行に移した。遺伝子破壊株内でのGFP融合Atgタンパク質の局在変化を遺伝学的に解析した結果は、今まで知られていなかったAtgタンパク質間の相互作用を明らかにすると共に、機能未知であったAtgタンパク質の機能を明らかにする上でも有用な情報を我々にもたらしつつある。

真核细胞为了适应营养匮乏的环境而降解自身组成成分的现象称为自噬。已知自噬涉及一系列过程，包括自噬体（以下简称AP）的形成、AP与作为细胞内降解区室的溶酶体/液泡的融合以及随后的降解，是一种广泛应用的细胞反应机制。保存在动物和植物中。在单细胞真核生物酿酒酵母中也发现了自噬，并且对自噬必需的基因组 ATG 的分析正在进行中。迄今为止，Atg 蛋白的定位分析都是使用细胞携带质粒的系统进行的。新推出的绿色荧光蛋白（以下简称GFP）标记方法将GFP序列直接插入酿酒酵母基因组中的目标位点，从而可以在活酵母细胞中进行生理条件下的蛋白质定位分析，这是一种有效的移动方法。向前。因此，今年，我们利用这种方法将GFP标签贴在尽可能多的Atg蛋白上，并确认了这些融合蛋白的定位。此外，我们利用酿酒酵母的优势，开发了对各菌株ATG基因进行全面破坏的系统，并进行了基因破坏。对基因破坏菌株中 GFP 融合的 Atg 蛋白的定位变化进行遗传分析的结果揭示了 Atg 蛋白之间以前未知的相互作用，以及功能未知的 Atg 蛋白的发现，也为我们提供了澄清的有用信息。的功能