新規骨特異的チャネル分子パネキシン3の骨形成における機能解析

新型骨特异性通道分子pannexin 3在骨形成中的功能分析

• 批准号: 21390427
• 负责人: 前田 真吾
• 金额: $ 7.65万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21390427/
• 关键词: 骨芽細胞分化; オステリクス; ヘミチャネル

平成21年度は、骨・軟骨におけるPannexin3の重要性を明らかにするために、培養骨芽細胞および骨・軟骨組織におけるPannexin3の発現を検討した。まず、培養骨芽細胞からmRNAを抽出し、RT-PCRにて遺伝子レベルでPannexin3が発現していることを確認した。さらに、蛋白レベルでPannexin3の発現を確認するために、2種類の特異的ペプチドをウサギに免疫し、抗Pannexin3抗体を作製した。作製した抗体および市販の抗Pannexin3抗体を用いてウエスタンブロッティングをおこなったところ、培養骨芽細胞において蛋白レベルでPannexin3が発現していることを確認できた。また、マウスのティッシュブロットによって、骨組織及び軟骨組織においてmRNAレベルでPannexin3が発現していることを明らかにした。次に、Pannexin3 KOマウスの解析に着手した。KOマウスのN1世代はレントゲン写真および骨格標本に明らかな表現型を認めなかった為、C57BL/6系統へのbackcrossを進めながら、レントゲン写真および骨格標本の解析を進めた。ところが、N5世代から出生直後に死亡するマウスが出始め、N8世代ではすべてのKOマウスが出生直後に死亡することがわかった。原因は明らかでないが、肋骨の異常による呼吸不全が考えられた。以上の結果から、Pannexin3が骨・軟骨組織において重要な働きを担っていることが示唆された。

在2009年，为了阐明pannexin3在骨骼和软骨中的重要性，研究了pannexin3在培养的成骨细胞中的表达以及骨和软骨组织。首先，从培养的成骨细胞中提取mRNA，RT-PCR证实pannexin3在基因水平上表达。此外，为了确认pannexin3在蛋白质水平上的表达，用两种特异性肽对兔子进行免疫，以产生抗Pannexin3抗体。使用制备的抗体和市售抗Pannexin3抗体进行蛋白质印迹，并证实pannexin3在培养的成骨细胞中在蛋白质水平上表达。此外，小鼠的组织印迹显示，pannexin3在骨和软骨组织的mRNA水平上表达。接下来，我们开始分析Pannexin3 KO小鼠。由于N1生成的KO小鼠在X射线和骨骼标本中没有显示出任何明确的表型，因此我们进行了反向交叉到C57BL/6线，并分析了X射线和骨骼标本。但是，发现小鼠在出生后立即在N5一代出生后立即死亡，并且在N8一代中，所有KO小鼠出生后立即死亡。原因尚不清楚，但是被认为是由异常肋骨引起的呼吸衰竭。以上结果表明，pannexin3在骨骼和软骨组织中起重要作用。