イヌの肥満細胞腫の分子病態解析とその臨床応用

犬肥大细胞瘤的分子病理分析及其临床应用

• 批准号: 09J01283
• 负责人: 竹内 由則
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01283/
• 关键词: イヌ; 肥満細胞腫; 分子病態; 分子標的治療

昨年度までの研究により、四種類のイヌの肥満細胞腫(Mast cell tumor, MCT)細胞株はKIT変異、c-Kitのリン酸化およびSCF発現について複数のパターンを有していることが明らかにされた。この結果を受け、昨年度の研究実施計画3に該当する研究として、これまでにKIT配列およびc-Kitリン酸化が同定された細胞株に対する4種のチロシンキナーゼ阻害剤(TKI)による増殖阻害効果を検討するとともに、この阻害効果に対するABCB1の影響を解析した。ABCB1はABCトランスポーターファミリーの一種であり、抗癌剤を含む多数の薬剤を排泄することから、その過剰発現がさまざまな腫傷の薬剤耐性に関与することが知られている。細胞株としてHRMC、VIMC1、CMMC1を使用し、TKIとしてAxitinib、Imatinib、Masitinib、Vatalanibの4剤を用いた。これら4剤のHRMC細胞に対するIC_<50>値は、VIMC1、CMMC1と比べると明らかに高く、その増殖阻害には高い薬物濃度が必要であった。HRMCおよびCMMC1においては、c-Kitリン酸化を抑制する濃度で細胞増殖も抑制された。これに対し、VIMC1のc-Kitリン酸化を抑制するには、その増殖を抑制するよりもはるかに高い濃度が必要であった。機能的なABCB1はVIMC1にのみ発現しており、その基質であるシクロスポリンを添加することで、VIMC1に対するTKIの効果がやや増強された。以上の結果より、KIT遺伝子変異のない細胞株(HRMC)はKIT遺伝子変異を有する細胞に比べてTKIに対する感受性が低いことが明らかにされた。また、VIMC1においては、TKIはc-Kit以外の標的に作用することによって増殖を抑制している可能性が高く、本研究において使用したTKIはABCB1の基質となりうることが示された。当成果については、San Diegoにて行われたVeterinary cancer society 2010 annual conferenceにて発表した。さらに、国際学術誌であるJournal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics誌に投稿し、受理された。

直到去年的研究表明，四种类型的犬类肥大细胞肿瘤（MCT）细胞系具有多种模式的试剂盒突变，C-KIT磷酸化和SCF表达。为了应对这些结果，作为一项根据去年的研究实施计划3的研究，我们研究了四种酪氨酸激酶抑制剂（TKI）对迄今为止试剂序列和C-KIT磷酸化的细胞系的生长抑制作用，并分析了ABCB1对这种抑制作用的影响。 ABCB1是ABC转运蛋白家族的一种类型，并且由于它排泄了包括抗癌药在内的大量药物，因此众所周知，其过表达与各种肿瘤伤害的耐药性有关。将HRMC，VIMC1和CMMC1用作细胞系，使用了四个TKI：Axitinib，Imatinib，Masitinib和Vatalanib。这四个药物的HRMC细胞的IC_ <50>显然高于VIMC1和CMMC1的IC_ <50>，并且需要高药物浓度来抑制其生长。在抑制C-KIT磷酸化的浓度下，在HRMC和CMMC1中也抑制细胞增殖。相比之下，为了抑制VIMC1的C型磷酸化，比抑制其生长所需的浓度要高得多。功能性ABCB1仅在VIMC1中表达，添加其底物环孢素，略微增强了TKI对VIMC1的影响。以上结果表明，没有套件基因突变的细胞系（HRMC）比携带KIT基因突变的细胞不太容易受到TKI的影响。此外，在VIMC1中，TKI可能通过作用于C-KIT以外的靶标抑制生长，并且表明这项研究中使用的TKI可能是ABCB1的底物。结果是在圣地亚哥举行的2010年兽医学会2010年会议上提出的。此外，它还提交给《国际学术杂志》兽医药理学和治疗学杂志，并被接受。

项目成果

Aberrant autophosphorylation of c-Kit receptor in canine mast cell tumor cell lines.

犬肥大细胞肿瘤细胞系中 c-Kit 受体的异常自磷酸化。

• 发表时间: 2010
• 期刊: Veterinary Immunology and Immunopathology
• 影响因子: 1.8
• 作者: Y.Takeuchi;Y.Fujino;M.Watanabe;T.Nakagawa;K.Ohno;N.Sasaki;S.Sugano;H.Tsujimoto.
• 通讯作者: H.Tsujimoto.

犬の肥満細胞腫細胞株における c-Kit 遺伝子全塩基配列解析およびKIT蛋白リン酸化の解析

犬肥大细胞瘤细胞系中完整的c-Kit基因序列分析和KIT蛋白磷酸化分析

• 发表时间: 2009
• 期刊: JVM獣医畜産新報 62(7)
• 作者: 竹内由則;藤野泰人;大野耕一;渡邊学;菅野純夫;佐々木伸雄;辻本元
• 通讯作者: 辻本元

Aberrant autophosphorylation of KIT in canine mast cell tumor cell lines

犬肥大细胞肿瘤细胞系中 KIT 的异常自磷酸化

• 发表时间: 2009
• 作者: Y.Takeuchi;Y.Fujino;M.Takahashi;M.Watanabe;K.Ohno;T.Nakagawa;R.Nishimura;N.Sasaki;S.Sugano;H.Tsujimoto
• 通讯作者: H.Tsujimoto

Biological effect of tyrosine kinase inhibitors on three canine mast cell tumor cell lines with and without c-kit mutation.

酪氨酸激酶抑制剂对具有和不具有 c-kit 突变的三种犬肥大细胞肿瘤细胞系的生物学效应。

• 发表时间: 2010
• 作者: Y.Takeuchi;Y.Fujino;M.Watanabe;T.Nakagawa;K.Fukushima;K.Ohno;N.Sasaki;S.Sugano;H.Tsujimoto.
• 通讯作者: H.Tsujimoto.

Biological effect of tyrosine kinase inhibitors on three canine mast cell tumor cell lines with various KIT statuses.

酪氨酸激酶抑制剂对具有不同 KIT 状态的三种犬肥大细胞肿瘤细胞系的生物学效应。

• 发表时间: 2011
• 期刊: Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics
• 影响因子: 1.3
• 作者: Y.Takeuchi;Y.Fujino;K.Fukushima;M.Watanabe;T.Nakagawa;K.Ohno;N.Sasaki;S.Sugano;H.Tsujimoto.
• 通讯作者: H.Tsujimoto.