神経系幹細胞の制御因子の探索と神経変性疾患治療への応用

寻找神经系统干细胞调控因子及其在神经退行性疾病治疗中的应用

基本信息

批准号：
09J00063
负责人：
川田浩一
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J00063/
关键词：
神経系幹細胞活性酸素一酸化窒素 NO cGMP経路細胞増殖

项目摘要

胎児海馬神経系幹細胞の増殖におけるNO/cGMP経路の役割について解析を進めた。NO合成酵素阻害薬のL-NAMEが細胞死に対して著変を与ることなくBrdU取り込みを著明に抑制したことから、同細胞の増殖を著明に抑制することが明らかとなった。一方、NOおよびスーパーオキシド供与薬のSIN-1は、BrdU取り込みを有意に促進させた。次に、可溶性グアニル酸シクラーゼ阻害薬のODQおよびプロテインキナーゼG阻害薬のKT5823はBrdU取り込み能をいずれも濃度依存的に抑制した。さらに、cGMPアナログの8-Br-cGMPはL-NAMEの増殖抑制作用に対して部分的な拮抗作用を示した。NOS活性は細胞内遊離Ca^<2+>濃度により制御されることから、各種Ca^<2+>チャネル遮断薬の神経系幹細胞の増殖に対する影響を解析した。NMDA受容体チャネルを遮断するMK-801およびイフェンプロジル、電位依存性Ca^<2+>チャネル遮断薬のニフェジピンおよび小胞体リアノジン受容体チャネル遮断薬のダントロレンは、いずれもBrdU取り込み能を有意に抑制したが、NO_2産生はダントロレンでのみ阻害され、他のCa^<2+>チャネル遮断薬では有意な変化は認められなかった。次いで、増殖シグナルに対するL-NAMEおよびODQの影響について解析を進めた。両薬物は、EGF受容体およびERKのリン酸化には著変を与えなかったが、Aktのリン酸化を著明に抑制した。以上の結果から、内在性ROSは神経系幹細胞の増殖に必須であることが示唆された。中でも、内在性NOは、NO/cGMP経路を介してAkt経路を活性化することが明らかとなった。さらに、神経系幹細胞の増殖にリアノジン受容体を介するNO/cGMP経路が必須であることが示された。本研究の成果は、発生期の神経系構築および成体中枢神経障害後のニューロン新生メカニズムの解明への貢献が期待される。

在胎儿海马神经系统干细胞增殖中对NO/CGMP途径的分析。很明显，由于没有合成酶抑制性药物的L-名称无意中控制了BRDU，而没有细胞死亡的变化，因此细胞显着降低了。另一方面，SIN-1（一种NO和超氧化物的提供）大大促进了BRDU的进口。接下来，可溶性沟化剂抑制剂和突起的粉刺G的ODQ抑制KT5823抑制了BRDU捕获能力作为浓度依赖性的。此外，CGMP类似物的8-BR-CGMP对L-名称的增殖抑制作用具有部分拮抗作用。由于NOS活性受细胞内游离Ca^<2+>的浓度控制，因此已经分析了各种Ca^<2+>阻断药物对神经干细胞生长的影响。 MK -801和I -FEN省阻止了NMDA受体通道，Nifejipin的Dantololene和Eoxy后NOJIN受体频道的块块，但它们都具有显着抑制的BRDU捕获能力。在其他CA^<2+>通道阻滞剂中未发现显着变化。然后，我们分析了L-名和ODQ对增殖信号的影响。两种药物都没有改变EGF受体和ERK的磷酸化，但已显着抑制了Akt的磷酸化。这些结果表明内部ROS对于神经系统干细胞的生长至关重要。最重要的是，很明显，内部不通过NO/CGMP路线激活AKT路线。此外，结果表明，没有通过后NOJIN受体的/CGMP途径对于神经干细胞的生长至关重要。这项研究的结果有望在发生期间神经元神经病后的神经元系统和神经元神经元机制的构建作出贡献。