マダニプロテアーゼインヒビターの機能解明と応用に関する研究

蜱蛋白酶抑制剂的功能阐明及应用研究

• 批准号: 09F09519
• 负责人: 辻 尚利
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09519/
• 关键词: マダニ; 節足動物媒介感染症; 吸血; 蛋白分解酵素; プロテアーゼインヒビター

本研究では、吸血によってマダニ中腸に取り込まれた宿主血液の消化及びバベシア原虫の伝播に関与するマダニ蛋白分解酵素の機能解明を推進し、殺ダニ剤による現行防除法に代わる有効で安全性と持続性の高いマダニ防除及び動物・ヒトバベシア症制圧技術を確立する。そのために、蛋白分解酵素の機能を制御するマダニプロテアーゼインヒビター(TPI)に焦点をあて、マダニ吸血行動と自然免疫に欠かせないヘモサイト由来のクニッツタイプキモトリプシンインヒビター(HlChI)の機能解明を行った。1.HlChIは6つのシステイン残基と3つのS-S結合が保存され、推定分子量は9.1kDaであった。2.HlChImRNAは全発育ステージで確認され、吸血によってその発現量は上方調節されていた。3.内在性HlChIの発現は、主にヘモサイトで確認された。4.HlChIは、牛膵臓キモトリプシンの加水分解作用を阻害することが確認されたが、牛膵臓トリプシンに対する阻害作用は弱く、豚エラスターゼ活性には影響が認めらなかったことから、キモトリプシンに対して特異反応を示すと考えられた。5.HlChIの活性はpH2-11、温度70℃までにおいて発揮された。6.HlChIは8M尿素及びpH8.0の2%SDS存在下で温度37℃24時間において安定であったが、2-メルカプトエタノールでは活性が完全に消失した。7.RNA干渉法で作製したHlChIノックダウンマダニでは、飽血不全と体重減少が惹起され、死滅するマダニが確認され、同時に著しい産卵数の低下が確認された。8.以上の成績より、HlChIは、高安定性のキモトリプシン特異的インヒビターであり、マダニ吸血・消化と繁殖過程の制御に重要な役割を果たしていると考えられた。

这项研究促进了涉及消化tick虫的滴答蛋白水解酶的功能，该功能通过吸收血液和Babesia Protozoa的传播来消化宿主血液，并建立有效，安全和可持续的壁虱控制以及使用Mite-Cidal-Cidal-Cidal agenter的当前控制方法来代替当前控制方法。为此，我们专注于调节蛋白酶功能的tick蛋白酶抑制剂（TPI），并阐明了源自血液材料的Kunitz-type chymotrypsin抑制剂（HLCHIS）的功能，这些抑制剂（HLCHIS）是tick虫血液吸血行为和先天免疫的必不可少的。 1. Hlchi保守，六个半胱氨酸残基和三个S-S键，预测分子量为9.1 kDa。 2.在所有发育阶段都证实了hlchimrna，其表达水平被吸血上调。 3。内源性HLCHI的表达主要在血细胞中得到证实。 4。已经证实，HLCHI抑制了牛胰腺胰凝乳蛋白酶的水解作用，但其对牛胰腺胰蛋白酶的抑制作用较弱，对猪弹性酶的活性没有影响，并且被认为对挥主丙吡啶的反应表现出特定的反应。 5。在pH 2-11处施加HLCHI的活性，温度高达70°C。 6.在存在8m尿素和pH 8.0时，Hlchi在24小时时在24小时时保持稳定，但是2-羟基乙醇的活性完全消失。 7。在由RNA干扰法产生的HLCHI敲低壁虱中，诱发了饱和失败和体重减轻，并确认了垂死的tick虫，并确认了卵的数量显着减少。 8。根据上述结果，人们认为HLCHI是一种高度稳定的辣椒蛋白特异性抑制剂，并且在tick滴吸血，消化和对生殖过程的控制中起着重要作用。

项目成果

A novel chymotripsin inhibitor from the hard tick Haemaphysalis longicornis is involved in blood-feeding process

来自硬蜱 Haemaphysalis longicornis 的新型糜蛋白酶抑制剂参与血液喂养过程

• 发表时间: 2011
• 作者: M. Abdul Alim;Naotoshi Tsuji;Takeharu Miyoshi;M. Khyrul Islam;Takeshi Hatta;Kayoko Yamaji;Anisuzzaman;Kozo Fujisaki
• 通讯作者: Kozo Fujisaki

Legumains are critical for blood feeding and digestion, midgut cellular remodeling and reproduction in the ixodid tick Haemaphysalis longicornis

豆角蛋白对于长角血蜱的血液喂养和消化、中肠细胞重塑和繁殖至关重要

• 发表时间: 2010
• 作者: M.Abdul Alim;Naotoshi Tsuji;Takeharu Miyoshi;M.Khyrul Islam;Takeshi Hatta;Anisuzzaman;Kozo Fujisaki
• 通讯作者: Kozo Fujisaki