白血病の分子機構解析とモデルマウスの作製

白血病分子机制分析及模型小鼠的产生

基本信息

批准号：
13307029
负责人：
平井久丸
金额：
$ 34.03万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

AML1(RUNX1)はRuntファミリーに属する転写因子である。AML1は染色体転座に伴いpre-B細胞性急性リンパ性白血病の発症に関わると考えられ、またプロモーター解析により転写因子Pax5と協調してBlk遺伝子の発現を正に調節することが知られている。以上のことからAML1はB細胞の機能に関わると考えられるが、その欠損マウスは成体型造血を欠失し胎生期12.5日で脳室を中心とする出血にて致死を示すため、解析不可能であった。今回我々は既に樹立したCre-LoxPシステムを用いたAML1コンディショナルノックアウトマウスの系を用いて、CD19-Creノックインマウスとの交配によりB細胞特異的にAML1を欠損するマウスを作製した。このマウスは脾臓、末梢リンパ節、末梢血のB細胞数に大きな変化を認めなかった。しかしながら、骨髄でimmature B細胞以降の分画が有意に減少し、AML1がB細胞初期分化に関わる可能性が示唆された。また、末梢リンパ組織でmarginal zone B細胞が有意に増えていた。さらに、骨髄、末梢血中の形質細胞が著明に減少していたものの、クラススイッチリコンビネーションは正常通り進行しており、LPS存在下でB細胞を培養したところ、コントロール群と同様に形質細胞へ誘導し得た。一方、様々な刺激下でB細胞を培養したところ、このマウスはコントロール群と比較し、細胞増殖が著しく、細胞表面活性化マーカーも強く発現し、免疫グロブリン各サブクラスの産生も亢進していた。以上の結果から、AML1はB細胞初期分化には促進的に、終末分化には抑制的に働く転写因子であることが考えられる。現在、B細胞におけるAML1の標的遺伝子をこのマウスの各障害部位において検索中である。

AML1 (RUNX1) 是属于 Runt 家族的转录因子。 AML1被认为因染色体易位而参与前B细胞急性淋巴细胞白血病的发生，启动子分析表明它与转录因子Pax5配合正向调节Blk基因表达。综上所述，AML1被认为与B细胞功能有关，但由于缺乏该基因的小鼠缺乏成体造血功能，在胚胎第12.5天时主要死于心室出血，因此无法进行分析。在这项研究中，我们使用了之前通过 Cre-LoxP 系统建立的 AML1 条件敲除小鼠系，并通过与 CD19-Cre 敲入小鼠杂交，创建了 B 细胞中特异性缺乏 AML1 的小鼠。这些小鼠的脾脏、外周淋巴结或外周血中的 B 细胞数量没有观察到显着变化。然而，骨髓中未成熟 B 细胞和后期部分的数量显着减少，表明 AML1 可能参与早期 B 细胞分化。此外，外周淋巴组织中边缘区B细胞显着增加。此外，尽管骨髓和外周血中的浆细胞明显减少，但类别转换重组正常进行，并且当在LPS存在下培养B细胞时，发现浆细胞与对照组相似能够导致。另一方面，当B细胞在各种刺激下培养时，与对照组相比，这些小鼠表现出显着的细胞增殖、细胞表面活化标记物的强烈表达以及每种免疫球蛋白亚类的产生增加。这些结果表明AML1是一种促进B细胞早期分化并抑制终末分化的转录因子。我们目前正在该小鼠各病变部位的 B 细胞中寻找 AML1 的靶基因。