ペプチド核酸を用いる遺伝子治療の開発研究

利用肽核酸进行基因治疗的研究与开发

基本信息

批准号：
13218006
负责人：
根東義則
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

PNAの合成についてはすでに多くの報告があり、技術的にはかなり確立されているが、固相合成に関する検討は未だ不十分であり、ハイスループットにPNAを供給する効率的なシステムを構築する必要がある。特に様々な塩基配列のPNAを合成するためには、自動合成機の利用が将来的に必要不可欠となるものと考えられるので、本研究においては特に固相合成を用いるPNA合成の自動合成についてまず検討した。本研究者はヘテロ環化合物を中心とした生理活性小分子の固相自動合成について、ACT496という合成機を用いて検討しており、技術的には対応可能であったが、まだ細部においては最適化が必要である。固相合成については、修飾核酸に関連してデアザプリンのモデルとしてインドール誘導体の合成研究も行った。また、合成機を用いずにより簡便に合成するためにマルチピン法を用いるPNA合成法の検討も行なっている。また蛍光プローブであるFITCを分子内に導入して、その細胞内への取り込みを正確にモニターする方法について検討し、PNAの細胞膜の透過性を評価するために有用であることが明らかとなった。生理機能の評価はまだ予試験段階であるが、HEK細胞(ヒト胎児腎細胞由来細胞株)に修飾核酸キュウーオシンの合成酵素HuTGTをコードする遺伝子のアンチセンスおよびセンスの細胞内への導入を検討し、蛍光顕微鏡下でFITCの蛍光をもとに透過性の評価と生理機能解析を行なっている。いずれも細胞膜を透過しにくい傾向が見られたため、細胞内への核酸導入試薬であるFuGENE6とともに処理し改善が見られた。さらに標的タンパクの発現抑制およびPNAの細胞毒性の評価を行なっている。細胞株の種類によってPNAの透過性が異なることが予想されるため他の細胞についても検討を行なった。

关于PNA的合成已经有很多报道，并且该技术已经相当成熟，但是关于固相合成的研究仍然不足，并且需要构建以高通量方式供应PNA的有效系统。是。特别是，为了合成具有各种碱基序列的PNA，我认为未来使用自动合成仪将变得至关重要。该研究人员研究了使用名为ACT496的合成器自动固相合成生物活性小分子，主要是杂环化合物，虽然技术上可以这样做，但在细节方面仍然不是最佳的。关于固相合成，我们还对吲哚衍生物的合成进行了研究，作为与修饰核酸相关的脱氮嘌呤的模型。我们还在研究使用多针方法的 PNA 合成方法，以便在不使用合成器的情况下更容易进行合成。我们还研究了一种通过将荧光探针 FITC 引入分子中来准确监测细胞摄取的方法，并发现它可用于评估 PNA 的细胞膜渗透性。虽然生理功能的评估仍处于初步测试阶段，但我们正在考虑将编码修饰的核酸kyu-osin合酶HuTGT的反义和正义基因引入HEK细胞（源自人胚胎肾细胞的细胞系）中。荧光显微镜下基于FITC荧光的通透性评价和生理功能分析。两者都难以渗透细胞膜，因此用FuGENE6（一种将核酸引入细胞的试剂）进行处理后，情况有所改善。此外，我们正在评估 PNA 对靶蛋白表达的抑制和细胞毒性。由于 PNA 的渗透性预计会根据细胞系类型的不同而有所不同，因此我们还研究了其他细胞。