Novel assay for determination of baculovirus titer using host cell binding of enzyme-displayed baculovirus

利用酶展示杆状病毒的宿主细胞结合测定杆状病毒滴度的新方法

• 批准号: 21560805
• 负责人: KIKIUCHI Ken-ichi
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21560805/
• 关键词: 生物機能工学; 生体認識; ウイルス; バイオテクノロジー; 昆虫細胞; バキュロウイルス; 酵素反応; リアルタイムPCR; ウイルス検出; ウイルス力価; 酵素展示

The present study aimed at developing a novel assay method using a baculovirus (BV)-host cell binding for the determination of BV titer. First, we constructed recombinant BV displaying either GST or EGFP on GP64 envelope protein in order to distinguish between infected and uninfected cells. However, the protein probes displayed on BVs were not sensitive enough to use for this purpose. In addition, it was so difficult to produce the recombinant BVs because of their high susceptibility to endogenous proteases. Second, we examined the BV-host cell binding conditions to separate active and inactive BVs. As a result, it was suggested that the BV-host cell binding was applicable to the BV titer determination by combining with real-time PCR.

本研究旨在使用杆状病毒（BV） - 托管细胞结合来确定BV滴度的新测定方法。首先，我们构建了重组BV，在GP64包膜蛋白上显示GST或EGFP，以区分感染和未感染的细胞。但是，在BVS上显示的蛋白质探针不足以用于此目的。此外，由于它们对内源性蛋白酶的敏感性很高，因此很难产生重组BV。其次，我们检查了BV-host细胞结合条件，以分离活性和无活性BV。结果，建议通过与实时PCR结合使用BV-host细胞结合适用于BV滴度测定。

项目成果

蛍光タンパク質融合GP64 の構築と昆虫細胞への結合性

荧光蛋白融合蛋白GP64的构建及其与昆虫细胞的结合

• 发表时间: 2009
• 作者: 村上 亮;後藤 猛;菊地 賢一
• 通讯作者: 菊地 賢一

GP64-蛍光プローブ融合タンパク質の構築とSf-9昆虫細胞への結合

GP64-荧光探针融合蛋白的构建及与Sf-9昆虫细胞的结合

• 发表时间: 2009
• 作者: 村上 亮;後藤 猛;菊地 賢一
• 通讯作者: 菊地 賢一

Purification and Characterization of Aspartic Protease Derived from Sf9 Insect Cells

• DOI: 10.1271/bbb.100476
• 发表时间: 2010-10-01
• 期刊: BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 1.6
• 作者: Gotoh, Takeshi;Ono, Hiroki;Takahashi, Saori
• 通讯作者: Takahashi, Saori

蛍光タンパク質融合GP64の構築と昆虫細胞への結合性

荧光蛋白融合蛋白GP64的构建及其与昆虫细胞的结合

• 发表时间: 2009
• 作者: 村上亮;後藤猛;菊地賢一
• 通讯作者: 菊地賢一

Real-time PCRを利用したバキュロウイルスタイター測定のための基礎検討

使用实时PCR测量杆状病毒滴度的基础研究

• 发表时间: 2012
• 作者: 佐藤 真一;佐藤 愛香;菊地 賢一;後藤 猛
• 通讯作者: 後藤 猛