新規発現クローニングシステムを活用した骨芽細胞制御因子の同定と機能解析

使用新型表达克隆系统鉴定和功能分析成骨细胞调节因子

• 批准号: 20659290
• 负责人: 西村 理行
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659290/
• 关键词: 骨芽細胞; 転写因子; コラーゲン; I型コラーゲン

1.Yeast-Two HybridアッセイによるクローニングI型コラーゲンプロモーター遺伝子の骨芽細胞特異的配列をbaitにしてYeast-Two Hybridアッセイを実施した。陽性クローンのうち、Prx1が含まれていた。そこで、Prx1の関与を検討するために、Prx1を過剰発現するとI型コラーゲンプロモーター遺伝子(2.3kb)が、著明に活性化された。しかしながら、Prx1は、I型コラーゲンプロモーター遺伝子の基本プロモーター領域のみを含むレポーター遺伝子を強く促進した。したがってPrx1は、骨芽細胞特異的配列より、基本転写因子に作用すると推察された。2.超高速シークエンサーによる解析I型コラーゲンの発現調節に関わる転写因子は、骨芽細胞の分化初期に発現変動すると推測された。しかしながら、転写因子の発現は、一般的には高くなく、マイクロアレイ解析などでは、埋もれてしまう懸念がある。そこで超高速シークエンサーを活用して骨芽細胞分化誘導過程の遺伝子発現パターンを検索し、目的遺伝子の同定を試みた。細胞としては、I型コラーゲンの発現変動を見やすい、SaOS2細胞を用いた。その結果、転写因子OsterixがBMP2による骨芽細胞分化に伴って上昇することが判明した。そこでOsterixを過剰発現させると、I型コラーゲンの発現が促進され、さらに、2.3kbのI型コラーゲン遺伝子プロモーターが著明に活性化されることを見出した。したがって、Osterixが、I型コラーゲンの発現調節に重要な役割を果たしていると示唆された。

1。通过酵母 - 两种混合试验克隆酵母 - 两种杂化测定，使用I型胶原蛋白启动子基因作为诱饵的成骨细胞特异性序列进行。在阳性克隆中，包括PRX1。因此，为了研究PRX1的参与，PRX1的过表达显着激活了I型胶原蛋白启动子基因（2.3 kb）。但是，PRX1强烈促进了仅包含I型胶原蛋白启动子基因基础启动子区域的报告基因。因此，据估计，PRX1作用于成骨细胞特异性序列的基本转录因子。 2。超快测序仪的分析，据推测，在成骨细胞分化的早期阶段，I型胶原蛋白表达变化的转录因子的表达变化。但是，转录因子的表达通常不高，并且有人担心它们可能埋在微阵列分析等中。因此，我们使用超快速测序仪在诱导成骨细胞分化的过程中搜索基因表达模式，并试图鉴定靶基因。作为细胞，使用了SAOS2细胞，很容易看出I型胶原蛋白表达的变化。结果，发现转录因子Osterix随BMP2的成骨细胞分化而增加。发现Osterix的过表达促进了I型胶原蛋白的表达，并且2.3 Kb I型胶原基因启动子被显着激活。因此，建议Osterix在调节I型胶原蛋白的表达中起重要作用。

项目成果

生命歯科医学のカッティング・エッジ

生物牙科的前沿

• 发表时间: 2008
• 作者: Kobayashi;Y;米田俊之
• 通讯作者: 米田俊之

Sox9 family members negatively regulate maturation and calcification of chondrocytes through up-regulation of PTHrP.

Sox9 家族成员通过上调 PTHrP 负向调节软骨细胞的成熟和钙化。

• 发表时间: 2009
• 期刊: Mol Biol Cell 20
• 作者: Amano K;Hata K;Suigita A;Takigawa Y;Ono K;Wakabayashi M;Kogo M;Nishimura R;Yoneda T
• 通讯作者: Yoneda T

The signaling mediated by the ER stress transducer. OASIS is involved in bone formation.

由内质网应激传感器介导的信号传导。

• 发表时间: 2009
• 期刊: Nature Cell Biol 11
• 作者: Murakami T;Saito A;Hino S;Kondo S;Kanemoto S;Chihara K;Sekiya H;Tsumagari K;Ochiai K;Yoshinaga K,Saitoh M;Nishimura R;Yoneda T;Kou I;Furuichi T;Ikegawa I;Ikawa M;Okabe M;Wanaka A;Imaizumi K
• 通讯作者: Imaizumi K

Regulation of ER stress response by BBF2H7/Sec23a pathway is essential for chondrogenesis.

BBF2H7/Sec23a 途径调节 ER 应激反应对于软骨形成至关重要。

• 发表时间: 2009
• 作者: 齋藤敦;日野真一郎;西村理行;米田俊之,古市達哉;池川志郎;今泉和則
• 通讯作者: 今泉和則

オステオポンチン、オステオネクチン.

骨桥蛋白，骨连接蛋白。

• 发表时间: 2010
• 作者: Yamada;Y;西村理行
• 通讯作者: 西村理行