緑内障視神経症における軸索輸送障害のリアルタイムイメージング

青光眼视神经病变轴突运输缺陷的实时成像

• 批准号: 20659271
• 负责人: 谷原 秀信
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659271/
• 关键词: 眼生化学; 分子生物学; 神経科学

本年度は、網膜神経節細胞の軸索流を解析する研究をおこなった。網膜神経節細胞の長期培養をおこない、GFPを結合させた脳由来神経栄養因子(brain-derived neurotrophic factor ; BDNF)の遺伝子をリポフェクタミンを用いて導入し、その軸索内での動きを観察した。従来の導入法では全体の1%以下の細胞においてしか、軸索流の観察可能な細胞がえられなかったが、生後3日目のラットを用いることで、10倍以上の効率でBDNF導入かつ軸索流観察可能な網膜神経節細胞を得ることが出来た。BDNFの軸索移動を定量評価したところ、軸索内では順行性の流れと逆行性の流れのいずれもみられ、その速度は、樹状突起に発現するBDNFに比べて速いことがあきらかになった。生体内の網膜で軸索流を観察するには、より大きな細胞内の粒子を観察する必要がある。そのために、細胞内小器官であるミトコンドリアとリソソームの蛍光標識を試み、網膜組織で蛍光標識されたミトコンドリアとリソソームの動きを捉えることに成功し、網膜組織内での軸索流の観察が可能になった。また、ライブでの観察のために、ミトコンドリアをCFPで標識したトランスジェニックマウスを繁殖させ、そのマウスの眼底を蛍光顕微鏡で観察をおこなうことができた。以上の研究は、生きた動物での網膜神経節細胞の軸索流の観察が可能であることを意味し、未だ仮説である緑内障視神経症の病態を確認することが可能となり、緑内障進行を網膜神経節細胞の細胞死よりも早い段階で診断することが可能になる診断システムの開発につながる結果がえられたと考えている。

今年，我们进行了一项研究，以分析视网膜神经体细胞的轴向流。进行了视网膜神经体细胞的长期培养，并使用Lipofectamine引入了组合GFP的脑衍生神经营养因子（BDNF）的基因，以观察轴搜索中的运动。在常规介绍方法中，可以在车轴流中观察到的细胞只能应用于总计1％或更少的细胞，但是通过在出生的第三天使用大鼠，BDNF引入的效率高10倍，BDNF效率更高，BDNF的效率更高。我能够获得可以观察到轴的视网膜神经节细胞。当量化BDNF的轴向搜索时，轴显示在轴向搜索中，并显示阶行和逆行流的流动，并且速度比在树突投影中表达的BDNF更快。为了观察活体中带有视网膜的轴向流，有必要观察较大的细胞颗粒。由于这个原因，它在尝试荧光体迹象方面取得了成功，并成功地捕获了视网膜组织标记荧光的线粒体和溶酶体，从而可以观察到视网膜组织中的轴向流。此外，对于实时观察，可以用荧光显微镜观察到用CFP签名的线粒体的转基因小鼠。上述研究意味着可以在活动物中观察到视网膜神经节细胞的轴流，并且可以证实青光眼视觉疾病的状况，这仍然是一种假设，并且我们相信我们相信我们相信的视网膜。诊断系统可以比神经细胞的细胞死亡更早地诊断，这导致了诊断系统的发展。

项目成果

眼発生の分子メカニズムの探究と眼疾患モデルへの展開

眼发育分子机制探索及眼病模型研制

• 发表时间: 2009
• 作者: Sanuki;R.;Onishi;A.;Koike;C.;Muramatsu;R.;Watanabe;S.;Muranishi;Y;Irie;S.;Ueno;S.;Koyasu;T.;Matsui;R.;Cherasse;Y.;Urade;Y.;Watanabe;D.;Kondo;M.;Yamashita;T. and Furukawa;T;稲谷大
• 通讯作者: 稲谷大

Live imaging of axonal transport in retinal ganglion cells.

视网膜神经节细胞轴突运输的实时成像。

• 发表时间: 2008
• 作者: Murofushi T;Kaga K;稲谷大;Takihara Y
• 通讯作者: Takihara Y