網膜芽細胞腫由来細胞に対する分化誘導機構との臨床応用への可能性の解明

视网膜母细胞瘤来源细胞分化诱导机制的阐明及临床应用的可能性

基本信息

批准号：
09877333
负责人：
谷原秀信
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、神経網膜の分化誘導状態にある初期発生におけるカドヘリンスーパーファミリーに属する細胞接着分子群(カドヘリシ-4〜-13やプロトカドヘリン)の時間的・空間的発現パターンをin vivoにおいて、in situハイブリダイゼーション・免疫組織染色の手法を用いて詳細まで明らかにし、網膜の細胞ごとに特異的なカドヘリンが発現していることを明らかにした。これにより、網膜の発生・分化・機能維持にカドヘリンが深く関わり、重要な役割を果たしている可能性が示唆された。そこで、昨年度からの研究に引き続き、カドヘリン-8、-11に特異的なFitc合成アンチセンスオリゴヌクレオチドを不活化センダイウイルスに融合させて作成したHVJ-cationic-1iposome法を用いて、培養網膜芽細胞腫由来細胞(Y-79細胞)の細胞核への遺伝子導入を試みた。30分間培養後、蛍光顕微鏡下での導入の確認を行ったところ、培養細胞において高頻度で細胞核におけるFitcによる蛍光は観察できたが、RT-PCR法および免疫染色にてカドヘリシ-8、-11の発現の確認を行ったところ、導入した遺伝子の発現は確認できなかった。また、遺伝子導入を試みた細胞を様々な神経網膜に特異的なマーカーとなる抗体(MAP-2、calbindin、TH、ChATなど)で免疫染色を行ったが、免疫染色性は確認できなかった。

我们使用杂交和免疫组织学染色技术，研究了神经视网膜原位分化诱导状态下早期发育过程中属于钙粘蛋白超家族（钙粘蛋白-4至-13和原钙粘蛋白）的细胞粘附分子的时间和空间表达模式。他们澄清了细节并揭示了视网膜中的每个细胞都表达特定的钙粘蛋白。这表明钙粘蛋白深入参与视网膜功能的发育、分化和维持，并可能发挥重要作用。因此，继去年的研究之后，我们尝试使用HVJ-cationic-1脂质体方法来转化培养的视网膜母细胞，该方法是通过将Fitc合成的钙粘蛋白-8和-11特异性反义寡核苷酸与灭活的仙台病毒融合而创建的。将基因导入肿瘤来源细胞（Y-79细胞）的细胞核中。孵育30分钟后，我们在荧光显微镜下确认引入，发现培养细胞中的细胞核中频繁观察到Fitc荧光，但RT-PCR和免疫染色显示存在cadhelysyl-8和-11。确认了导入基因的表达，无法确认导入基因的表达。此外，我们对试图用各种神经视网膜特异性标记抗体（MAP-2、钙结合蛋白、TH、ChAT等）导入基因的细胞进行了免疫染色，但无法确认免疫染色。