mRNAスプライシング制御におけるインスリン受容体基質の新機能解明の試み

尝试阐明胰岛素受体底物调节mRNA剪接的新功能

基本信息

批准号：
20658065
负责人：
高橋伸一郎
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、インスリンやインスリン様成長因子(IGF)のシグナルを仲介するインスリン受容体基質(IRS)のmRNAスプライシング制御における新機能の解明を目的に研究を行った。その結果、1.293細胞やMCF7乳ガン細胞の抽出液をRNaseで処理し、IRSを含む複合体の大きさをスクロース密度分画法などで解析した結果、RNase処理によって複合体の大きさが減少したことから、これらの細胞内でIRSがRNAと複合体を形成していることがわかった。2.IRSと結合するRNAを特定するため、IRS-1を293細胞に発現し、相互作用するRNAをcross-linking immunoprecipitation(CLIP)法によって解析した結果、約40種のmRNA、スプライソソームを構成するU2snRNA、およびU6snRNAの同定に成功した。同定されたmRNAの一部はイントロン配列でIRSと結合することから、未成熟RNAとしてIRSと相互作用していると考えられた。3.IRS-1/2は細胞質に存在することが知られているが、免疫染色法による解析の結果、MCF7乳ガン細胞において一部は核内にも存在し、特にスペックル状の構造に集積していることがわかった。4.IRS-1を293細胞に過剰発現し、同定されたIRS-1結合性mRNAをPCR法で増幅した結果、一部のmRNAはIRS-1の過剰発現によって未成熟型RNAが増加したことから、IRS-1がmRNAスプライシングを抑制すると考えられた。一連の解析から、核内における未成熟mRNAのスプライシング制御というIRSの新機能を示すことに成功した。

申请人进行了研究，以阐明胰岛素受体底物（IRS）的mRNA纵向控制中的新功能，该功能介导了胰岛素和胰岛素样生长因子（IGF）的信号。结果，通过RNase处理1.293个细胞和MCF7牛奶癌细胞提取物，并通过SCRAUS密度分布方法等分析包含IRS的复合物的大小，并且由于RNase处理，复合物的大小已降低。事实证明，IRS在这些细胞中形成了带有RNA的复合物。 2。为了识别RNA结合到与IR的结合，在293个细胞中表达IRS-1，并通过交联免疫沉淀（Clip）ACT分析RNA，并成功构成了大约40个mRNA和Supuro Sosome。确定。一些已鉴定的mRNA与内含子序列结合与IRS，因此被认为与IRS互联为未成熟RNA。 3。众所周知，IRS-1/2存在于细胞质中，但是由于免疫染色方法的分析，一些MCF7牛奶癌细胞也存在于细胞核中，尤其是在光谱结构中知道我正在这样做。 4。由于IRS-1在293个细胞中的过度表示，MRNA的数量增加了IRS-1的过表达，并通过PCR方法鉴定出IRS-1结合mRNA认为IRS-1会抑制mRNA弹药。一系列分析在核武器中未成熟mRNA的Spricing控制的IRS功能中取得了成功。