アポトーシス制御にかかわる新規蛋白質の探査

寻找参与细胞凋亡调节的新蛋白质

基本信息

批准号：
12217051
负责人：
須田貴司
金额：
$ 10.05万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

新たな抗がん剤や癌治療法の標的分子を探索する目的で、アポトーシス制御に係る新規蛋白質の探索を行った。昨年度樹立したシトクロームcを高感度に検出するELISA系を用い、新たに樹立した抗ミトコンドリア抗体産生ハイブリドーマ450株の産生する抗体について、ミトコンドリアからのチトクロムC放出促進、或いは抑制作用があるかを検討した。しかし、そのような抗体は得られなかった。また、ミトコンドリアからのチトクロムc放出を誘導するアポトーシス促進性BcI-2ファミリーに属するBid蛋白と相互作用する分子をyeast-two-hybrid法によって探索した。human T Iymphoma, Fetal Liver, BrainのcDNAライブラリーよりBidと結合しうる因子をコードするcDNA断片を12種類得た。このうち2種類について動物細胞内でのBidとの結合が確認できた。また、Bidで誘導されるapoptosisを抑制する作用が認められた。これらの分子について、さらに詳細な解析を行っている。新規デス受容体様分子DR6を種々の動物細胞に導入し、その機能を検討した。報告されているようなアポトーシスの誘導は全長のDR6では認められなかったが、NF-kBの弱い活性化が認められた。さらに、抗DR6抗体を作成しDR3分子を架橋しても、アポトーシスの誘導は認められなかった。また、DR6-Fc融合蛋白を調整し、この分子に特異的に結合する細胞表面分子を発現する細胞株を特定した。この分子はDR6リガンドである可能1性があり、現在その同定を試みている。

为了寻找新的抗癌药物和癌症治疗的靶分子，我们寻找参与细胞凋亡调节的新型蛋白质。利用去年建立的高灵敏度检测细胞色素C的ELISA系统，我们研究了新建立的450株产生抗线粒体抗体的杂交瘤菌株产生的抗体是否具有促进或抑制线粒体释放细胞色素C的作用。然而，没有获得这样的抗体。我们还使用酵母双杂交方法寻找与 Bid 蛋白相互作用的分子，Bid 蛋白属于促凋亡 Bcl-2 家族，可诱导线粒体释放细胞色素 c。我们从人T淋巴瘤、胎肝和脑的cDNA文库中获得了12种编码能够与Bid结合的因子的cDNA片段。其中两个已被证实与动物细胞中的 Bid 结合。此外，还观察到对 Bid 诱导的细胞凋亡的抑制作用。我们正在对这些分子进行进一步的详细分析。我们将一种新型死亡受体样分子 DR6 引入各种动物细胞中并研究其功能。据报道，全长 DR6 不会诱导细胞凋亡，但观察到 NF-kB 的激活较弱。此外，即使产生抗 DR6 抗体并将其与 DR3 分子交联，也没有观察到细胞凋亡的诱导。我们还制备了 DR6-Fc 融合蛋白，并鉴定了表达与该融合蛋白特异性结合的细胞表面分子的细胞系。该分子可能是DR6配体，我们目前正在尝试对其进行鉴定。