感染個体内におけるHIV-1プロウイルスの存在形態

HIV-1原病毒在感染者体内的存在形式

基本信息

批准号：
12035224
负责人：
加藤真吾
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12035224/
关键词：
HIV-1 in vivo PBMC プロウイルス逆転写 RNA-DNA hybrid competitive PCR 抗レトロウイルス療法

项目摘要

ヒト体内におけるHIV-1の標的細胞のほとんどは休止期にある。休止期にある細胞はdNTP poolが小さいために、細胞内に侵入したHIV-1RNAゲノムは逆転写の中間体、すなわちRNA-DNA hybridの状態で存在している可能性が高い。我々は昨年度までの研究で、制限酵素Mse Iによる切断と定量的PCRを併用することによってこのhybridを定量する方法を確立した。本年度は、この方法によるhybridの定量値にHIV-1 ssDNAは含まれないことをまず明らかにし、次にこの方法を用いて、未刺激のPBMCと抗CD3抗体で刺激したPBMCにおけるhybrid形成の速度論を調べた。その結果、未刺激PBMCではhybridが感染1日後にピークを示しその後dsDNAに変化していったが、刺激PBMCでは感染2時間後にhybridが一時的に検出されるだけでdsDNAが主に産生されることが分かった。このことから、感染者のPBMC中のhybrid量は測定時から2、3日以前までに細胞に感染したウイルス量を反映していることが示唆された。次に、14人の長期未発症者を対象に、CD4の値に対するHIV-1 RNA、HIV-1DNA、HIV-1RNA/DNA hybridの各量の関係を、過去2年間における平均値をもとに調べた結果、RNA/DNA hybridのみがCD4値に対して統計的に有意な負の相関があることが分かった。さらに、HAART療法を受けている17人の感染者を対象に、HAART開始後のHIV-1 RNA/DNA hybrid量の変化を調べた。ほとんどの場合、HIV-1 RNA量の変化と平行の関係があったが、HIV-1 RNA量があまり下がらないのにCD4値が上昇した2例においてhybrid量が有意に減少していた。今後、HAARTの治療効果をみる指標としてHIV-1 RNA-DNA hybrid量が有効であるかどうかを統計的に証明する方法を検討する。また、hybridが主に存在するT細胞サブセットを調べることによって、in vivoにおけるHIV-1感染の主要な標的細胞群を明らかにしたい。

人体内大多数HIV-1的靶细胞都处于休眠期。由于处于静息期的细胞有一个小的dNTP库，因此进入细胞的HIV-1 RNA基因组很可能以逆转录中间体的形式存在，即RNA-DNA杂合体。在我们去年的研究中，我们建立了一种通过将限制性酶 Mse I 切割和定量 PCR 相结合来定量该杂交体的方法。今年，我们首先澄清了通过该方法获得的杂交定量值中不包括HIV-1 ssDNA，然后使用该方法研究了未刺激的PBMC和用抗CD3抗体刺激的PBMC中的杂交形成率。进入理论。结果，在未刺激的PBMC中，杂交在感染后1天达到峰值，然后转变为dsDNA，而在刺激的PBMC中，仅在感染后2小时暂时检测到杂交，并且主要产生dsDNA。这表明，感染个体的 PBMC 中的杂交量反映了测量前两三天内感染细胞的病毒量。接下来，我们根据平均值，研究了 14 名长期无症状患者的 HIV-1 RNA、HIV-1 DNA 和 HIV-1 RNA/DNA 杂交体的量与 CD4 水平之间的关系在过去的两年中，我们的调查结果发现，只有 RNA/DNA 杂交体与 CD4 水平具有统计学上显着的负相关性。此外，我们调查了 17 名接受 HAART 治疗的感染患者开始 HAART 后 HIV-1 RNA/DNA 杂交体数量的变化。在大多数情况下，与 HIV-1 RNA 水平的变化存在平行关系，但在两种情况下，尽管 HIV-1 RNA 水平没有显着下降，但 CD4 水平却增加了，混合水平显着下降。未来我们将考虑用统计方法证明HIV-1 RNA-DNA杂交体的量是否有效作为HAART治疗效果的指标。我们还希望通过研究主要存在杂交体的T细胞亚群来阐明体内HIV-1感染的主要靶细胞群。