Induced pluripotent stem cell-derived dendritic cell vaccine therapy genetically modified on the ubiquitin-proteasome system

对泛素-蛋白酶体系统进行基因改造的诱导多能干细胞衍生的树突状细胞疫苗疗法

• 批准号: 22K20834
• 负责人: 冨永 信太
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20834/
• 关键词: がん免疫療法; 樹状細胞ワクチン; iPS細胞; ユビキチンプロテアソーム系

より免疫原性の高いTAAとしてMesothelin (MSLN)をターゲットとした．また，iPSDCsの抗原提示能を増強する工夫として，ユビキチンプロテアソーム系による抗原プロセッシングに着目した．その結果，(1) 3名の健常人ドナーからMSLN遺伝子導入iPSDCs (iPSDCs-MSLN)を作成し，いずれのドナーにおいてもiPSDCs-MSLNにより誘導したCTLsは，MSLN発現ターゲット細胞に対する細胞傷害活性を示したことを証明した．また，ユビキチンとMSLNの融合遺伝子をiPSDCsに導入する効果として，(2)-1 iPSDCs内のMSLNタンパク発現を免疫染色とFACSで評価することで，Ub-MSLN融合遺伝子導入iPSDCs (iPSDCs-UbMSLN)ではiPSDCs-MSLNと比較してiPSDCs内でのMSLNの蛋白分解が亢進しており，その蛋白分解はプロテアソームに依存することが示された．また，(2)-2 Pentamer assayにより，iPSDCs内のMSLN蛋白分解の亢進は，iPSDCs-UbMSLNにおけるMSLN由来エピトープペプチドの抗原提示能を高め，iPSDCs-MSLNと比べてMSLN特異的CTLsをより多く誘導することを示した．さらに，(2)-3 iPSDCs-UbMSLNはiPSDCs-MSLNと比べて細胞傷害活性も高める可能性が51Cr-release assayにより示唆された．これらの結果から，ユビキチンとMSLNを同時に発現する遺伝子改変iPSDCsワクチンは，より多くのMSLN特異的CTLsを誘導し，より強力な細胞傷害活性をもたらすことを示した．

我们将间皮素 (MSLN) 作为一种更具免疫原性的 TAA。我们还关注泛素蛋白酶体系统对抗原的加工，以此作为增强 iPSDC 抗原呈递能力的一种方法。结果，（1）从三个健康供体中产生了导入MSLN基因的iPSDC（iPSDCs-MSLN），并且在所有供体中由iPSDCs-MSLN诱导的CTL都表现出针对表达MSLN的靶细胞的细胞毒性活性。另外，对于将泛素和MSLN融合基因导入iPSDC的效果，(2)-1通过免疫染色和FACS评估iPSDC中MSLN蛋白表达，我们发现：在(iPSDCs-UbMSLN)中，与iPSDCs-MSLN相比，iPSDCs内MSLN的蛋白水解加速，并且蛋白水解显示出依赖于蛋白酶体。此外，(2)-2 五聚体测定显示，与 iPSDC-MSLN 相比，iPSDC 内增强的 MSLN 蛋白水解增强了 iPSDC-UbMSLN 中 MSLN 衍生表位肽的抗原呈递能力，并诱导更多的 MSLN 特异性 CTL。此外，51Cr 释放测定表明，与 iPSDCs-MSLN 相比，(2)-3 iPSDCs-UbMSLN 可能具有增强的细胞毒活性。这些结果表明，共表达泛素和MSLN的转基因iPSDCs疫苗可诱导更多的MSLN特异性CTL，并具有更强的细胞毒活性。

项目成果

Induced pluripotent stem cell-derived dendritic cell vaccine therapy genetically modified on the ubiquitin-proteasome system

• DOI: 10.1038/s41434-023-00388-z
• 发表时间: 2023-03-23
• 期刊: GENE THERAPY
• 影响因子: 5.1
• 作者: Tominaga，Shinta;Ojima，Toshiyasu;Yamaue，Hiroki
• 通讯作者: Yamaue，Hiroki