脳老化因子の同定とアルツハイマー病発症機序の解明

识别大脑衰老因素并阐明阿尔茨海默病发病机制

基本信息

批准号：
00J60504
负责人：
渡辺哲史
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nagoya University (2002)The University of Tokyo (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年までの検討によりヒト脳由来のヘパラン硫酸プロテオグリカンであるグリピカン-1が凝集化Aβ40とヘパラン硫酸鎖依存的に結合すること、そしてこのグリピカン-1が細胞膜上のラフトあるいはカベオラと呼ばれる特異的な微小ドメインにAβとともに集積していることが明らかとなった。以上の結果から、細胞膜上の限局された場において効率的にAβとグリピカン-1が結合することで、Aβの安定性や凝集体形成が促進されている可能性が示唆された。さらにグリピカン-1の生理的な役割を調べるため、ヒトneuroblastoma細胞であるSH-SY5Y細胞にグリピカン-1を強制発現させた細胞を作成し解析した。まず、MTT法により細胞の生存率を検討した結果、APPとグリピカン-1を共発現させた細胞では経時的に生存率が減少していったが、グリピカン-1単独では生存率に変化は見られなかった。また、Thapsigargin処理により小胞体ストレスを誘導した場合、APPとグリピカン-1の共発現細胞においてAPP単独発現細胞よりもストレスに対して脆弱性を示した。この他、SH-SY5Y細胞の培養液中にAβを加えて培養後、内因性のグリピカン-1の発現を調べた結果、無処理の細胞に比べてグリピカン-1の発現に増加が見られた。これらの結果から、脳内においてAβ産生が亢進するとグリピカン-1の発現が増加し、それに伴い神経細胞死が起きやすくなると考えられる。

直到去年进行的研究表明，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1（一种源自人脑的硫酸乙酰肝素蛋白多糖）以硫酸乙酰肝素链依赖性方式与聚集的 Aβ40 结合，并且这种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1 在大脑中形成称为“筏”或“小窝”的特定微观结构。很明显，Aβ 在该结构域中积累。上述结果表明，Aβ和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1在细胞膜局部区域的有效结合可能促进Aβ的稳定性和聚集体的形成。此外，为了研究磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的生理作用，我们生成并分析了强制表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞。首先，我们使用MTT方法检查了细胞存活率，发现共表达APP和glypican-1的细胞的存活率随着时间的推移而降低，但单独表达glypican-1时没有观察到存活率的变化。 't。此外，当毒胡萝卜素处理诱导内质网应激时，共表达 APP 和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1 的细胞比单独表达 APP 的细胞更容易受到应激。此外，当我们在培养基中添加Aβ培养SH-SY5Y细胞后研究内源性磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的表达时，我们发现与未处理的细胞相比，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的表达增加。这些结果表明，当大脑中 Aβ 产量增加时，磷脂酰肌醇蛋白聚糖 (glypican-1) 的表达就会增加，从而更有可能发生神经元细胞死亡。