魚類のインターロイキン4受容体による液性免疫制御機構の解明

阐明鱼类白细胞介素4受体的体液免疫控制机制

基本信息

批准号：
20780144
负责人：
大谷真紀
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20780144/
关键词：
ギンブナインターロイキン4受容体インターロイキン4 B細胞

项目摘要

ギンブナにおけるIL-4受容体(IL-4Rα)遺伝子の単離のため、部分配列を元に5'RACE, 3'RACE法を試みたが、腎臓や脾臓組織から抽出したRNA由来のcDNAから完全長1L-4Rを得ることは出来なかった。そこで、IgM陽性(IgM^+)の成熟B細胞、もしくは活性化B細胞由来の鋳型cDNAをPCR増幅用鋳型とするため、抗ギンブナIgMモノクローナル抗体を用いたギンブナにおけるlgM^+B細胞の亜集団解析を進めた。その結果、ギンブナの腎臓B細胞は未分化B細胞から抗体産生細胞まで様々なB細胞亜集団によって構成されているのに対し、脾臓B細胞は成熟B細胞から活性化B細胞までの一部のB細胞亜集団からなっていることが示唆された。最近、これらの細胞集団の内でも特に抗原刺激によって変動する集団を特定しており、この細胞集団がIL-4Rを最も発現している可能性が高く、次年度はこの細胞集団からのIL-4R遺伝子の単離を試みる。一方で、IL-4Rのシグナル伝達機構に関する解析にはIL-4RのリガンドであるIL-4が必要不可欠であるが、塩基配列の保存性が低いために同定が難航していたが、ついに魚類におけるIL-4遺伝子の同定、単離に成功した。魚類はIL-4/13AおよびIL-4/13Bと名付けた2つの遺伝子を持っており、アミノ酸配列から予測される構造および機能は哺乳類のIL-4、IL-13と相同であることが示唆された。さらに種々のマイトジェン刺激に対してIL-4/13Aは強く誘導されたが、IL-4/13Bは変化しなかったことから、発現時期や機能が異なっていることが推測される。

为了分离长颈鹿的IL-4受体（IL-4Rα）基因，我们尝试了基于部分序列的5'RACE和3'RACE方法，但无法完全分离IL-4受体（IL-4Rα）基因来自从肾和脾组织中提取的RNA，我无法得到长1L-4R。因此，为了使用源自IgM阳性（IgM^+）成熟B细胞或活化B细胞的模板cDNA作为PCR扩增的模板，我们使用抗Gingbuna IgM单克隆抗体来研究IgM^+B亚群我们继续分析 Gingbuna 中的细胞。因此，银杏中的肾 B 细胞由各种 B 细胞亚群组成，从未分化的 B 细胞到抗体产生细胞，而脾 B 细胞则由成熟 B 细胞到活化的 B 细胞的亚群组成。由 B 细胞亚群组成。最近，在这些细胞群中，我们鉴定了一个由于抗原刺激而特别波动的细胞群，并且该细胞群最有可能表达IL-4R，尝试分离4R基因。另一方面，IL-4R的配体IL-4对于分析IL-4R的信号转导机制至关重要，但由于碱基序列的保守性较低，鉴定一直很困难，但最终得到了证实。成功鉴定并分离出鱼类中的IL-4基因。鱼类有两个基因，名为IL-4/13A和IL-4/13B，从氨基酸序列预测的结构和功能表明它们与哺乳动物IL-4和IL-13同源。此外，IL-4/13A响应各种有丝分裂原刺激而被强烈诱导，但IL-4/13B保持不变，表明表达和功能的时间是不同的。

项目成果

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Evolution of the vertebrate Th2 cytokine genomic region in teleost fish

硬骨鱼脊椎动物 Th2 细胞因子基因组区域的进化

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Maki Ohtani;Nobuhiro Hayashi;Keiichiro Hashimoto;Hans M. Diikstra. Teruvuki Nakanishi
通讯作者：
Hans M. Diikstra. Teruvuki Nakanishi

Comprehensive clarification of two paralogous interleukin 4/13 loci in teleost fish