メトトレキサート関連リンパ増殖性疾患が自然退縮する生物学的機序の解明

阐明甲氨蝶呤相关淋巴增殖性疾病自然消退的生物学机制

• 批准号: 22K15404
• 负责人: 大谷 真紀
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15404/
• 关键词: メトトレキサート関連リンパ増殖性疾患; 自然退縮; EBウイルス; リンパ腫

メトトレキサート関連リンパ増殖性疾患(MTX-LPD)には、病理組織学的にも遺伝学的にも明らかに悪性と考えられる特徴を示しながら、 MTX投与中止のみで自然退縮する症例が見られる。病理組織学的診断から予測される病態予後と相違が生じており、MTX-LPDが自然退縮する生物学的機序の解明が求められている。本研究では、MTX-LPDの自然退縮と関連する生物学的特徴を解明するため、1)パラフィンブロックを用いた免疫組織学的解析、2) Epstain-Barrウイルス(EBV)を感染させたリンパ芽球様細胞株(EBV-LCL)を用いたエピジェネティックな変化について解析する予定とした。2022年度は、MTX-LPD病理組織標本を用いて5-hmCの免疫染色を行い、腫瘍細胞における免疫組織学的発現の頻度を検討した。腫瘍細胞の 5-hmC陽性率は約 4.8%～95%であった。また、背景の非腫瘍性リンパ球については、自然退縮群では非退縮群と比較して CD8陽性細胞の割合が高い傾向が見られたが、CD4の免疫染色では陽性細胞数のカウントが可能な染色結果が得られなかったことから、再度免疫染色の条件検討を行い、今後は良好な染色の得られた他クローンを用いることを決めた。CD56などの分化抗原や Foxp3などの核内転写因子、細胞傷害性 T細胞に発現する PD-1, その他の細胞傷害性因子などについては、免疫染色の条件検討を完了した。

有些甲氨蝶呤相关淋巴组织增生性疾病 (MTX-LPD) 病例表现出明显的组织病理学和遗传特征，被认为是恶性的，但只需停止 MTX 给药即可自发消退。组织病理学诊断预测的病理和预后存在差异，需要阐明MTX-LPD自发消退的生物学机制。在本研究中，为了阐明与 MTX-LPD 自发消退相关的生物学特征，我们进行了 1) 使用石蜡块的免疫组织学分析，以及 2) 感染 Epstain-Barr 病毒 (EBV) 的淋巴芽，我们计划分析表观遗传学。使用球形细胞系（EBV-LCL）进行改变。 2022年，我们利用MTX-LPD病理标本对5-hmC进行了免疫染色，并检测了肿瘤细胞中免疫组织学表达的频率。肿瘤细胞5-hmC阳性率约为4.8%～95%。对于背景非肿瘤性淋巴细胞，与非消退组相比，自然消退组中CD8阳性细胞的百分比往往较高，但由于没有染色结果，因此可以用CD4免疫染色来计数阳性细胞的数量。获得后，我们重新检查了免疫染色条件，并决定将来使用其他染色良好的克隆。我们已经完成了分化抗原（如CD56）、核转录因子（如Foxp3、细胞毒性T细胞上表达的PD-1）和其他细胞毒性因子的免疫染色条件的研究。